本研究根據(jù)實(shí)驗(yàn)室轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫(kù)利用PCR技術(shù)克隆了大黃魚(yú)（Larimichthys crocea）轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β激活激酶1（LcTAK1）和TAK1結(jié)合蛋白1（LcTAB1）、TAK1結(jié)合蛋白2（LcTAB2）的cDNA序列,對(duì)其氨基酸序列及蛋白結(jié)構(gòu)進(jìn)行了預(yù)測(cè)和分析。研究了它們?cè)诖簏S魚(yú)各組織中的表達(dá)情況;檢測(cè)了經(jīng)病原相關(guān)分子模式（PAMP）刺激后,TAK1和TAB1、TAB2基因在大黃魚(yú)腎細(xì)胞系（LCK）中轉(zhuǎn)錄水平的時(shí)空表達(dá)譜;并對(duì)三個(gè)基因進(jìn)行亞細(xì)胞定位分析。此外,本研究還構(gòu)建了它們的過(guò)表達(dá)重組載體,將TAK1與其結(jié)合蛋白TAB1/TAB2分別或共轉(zhuǎn)染人胚胎腎細(xì)胞系293T（HEK293T）,檢測(cè)不同PAMPs刺激后對(duì)NF-κB的激活及下游細(xì)胞因子腫瘤壞死因子α（TNF-α）,白細(xì)胞介素（IL）IL-6、IL-1β、IL-8和I型干擾素（IFN-I）等基因轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)的調(diào)控。主要結(jié)果如下:（1）LcTAK1與其結(jié)合蛋白TAB1、TAB2的克隆、表達(dá)分析及定位LcTAK1基因ORF為1725 bp,編碼574個(gè)氨基酸（aa）,預(yù)測(cè)分子量（Mw）64.2 kDa,理論等電點(diǎn)（pI）6.69... 

【文章頁(yè)數(shù)】：65 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 引言
    1.1 大黃魚(yú)簡(jiǎn)介
    1.2 研究背景概述
        1.2.1 TAK1的主要功能及研究進(jìn)展
        1.2.2 TAK1結(jié)合蛋白TAB1的研究進(jìn)展
        1.2.3 TAK1結(jié)合蛋白TAB2的研究進(jìn)展
    1.3 本研究的目的及意義
第2章 大黃魚(yú)TAK1與結(jié)合蛋白的克隆、表達(dá)分析及定位
    2.1 材料與方法
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 LcTAK1、LcTAB1、LcTAB2cDNA克隆
        2.1.3 LcTAK1、LcTAB1、LcTAB2組織表達(dá)與刺激表達(dá)分析
        2.1.4 LcTAK1、LcTAB1、LcTAB2的亞細(xì)胞定位研究
    2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.2.1 LcTAK1、LcTAB1、LcTAB2cDNA克隆及序列分析
        2.2.2 LcTAK1、LcTAB1、LcTAB2表達(dá)譜分析
        2.2.3 LcTAK1、LcTAB1、LcTAB2亞細(xì)胞定位結(jié)果
    2.3 討論
第3章 LcTAK1與LcTAB1對(duì)NF-кB信號(hào)通路調(diào)控機(jī)制
    3.1 材料與方法
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 大黃魚(yú)TAK1和TAB1過(guò)表達(dá)載體構(gòu)建
        3.1.3 LcTAK1和LcTAB1過(guò)表達(dá)對(duì)NF-кB啟動(dòng)子活性影響
        3.1.4 LcTAK1和LcTAB1過(guò)表達(dá)對(duì)細(xì)胞因子mRNA水平表達(dá)影響
    3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.2.1 大黃魚(yú)TAK1和TAB1過(guò)表達(dá)載體構(gòu)建
        3.2.2 LcTAK1和LcTAB1過(guò)表達(dá)對(duì)NF-кB啟動(dòng)子活性影響
        3.2.3 LcTAK1和LcTAB1過(guò)表達(dá)對(duì)下游細(xì)胞因子mRNA水平表達(dá)影響
    3.3 討論
第4章 LcTAK1與LcTAB2對(duì)NF-κB信號(hào)通路調(diào)控機(jī)制
    4.1 材料與方法
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.2 大黃魚(yú)TAB2過(guò)表達(dá)載體構(gòu)建
        4.1.3 LcTAK1與LcTAB2過(guò)表達(dá)對(duì)NF-κB及其亞基p65啟動(dòng)子活性影響
        4.1.4 LcTAK1與LcTAB2過(guò)表達(dá)對(duì)下游細(xì)胞因子啟動(dòng)子活性影響
        4.1.5 LcTAK1與LcTAB2過(guò)表達(dá)對(duì)下游細(xì)胞因子mRNA水平表達(dá)影響
    4.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.2.1 LcTAB2過(guò)表達(dá)載體構(gòu)建
        4.2.2 LcTAK1與LcTAB2過(guò)表達(dá)對(duì)NF-κB及其亞基p65啟動(dòng)子影響
        4.2.3 LcTAK1與LcTAB2過(guò)表達(dá)對(duì)下游細(xì)胞因子啟動(dòng)子活性影響
        4.2.4 LcTAK1與LcTAB2過(guò)表達(dá)對(duì)下游細(xì)胞因子mRNA水平表達(dá)影響
    4.3 討論
第5章 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[7]網(wǎng)箱養(yǎng)殖大黃魚(yú)與天然大黃魚(yú)營(yíng)養(yǎng)成分的比較分析[J]. 段青源,鐘惠英,斯列鋼,麥康森.  浙江海洋學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2000(02)



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