作為目前最新、最先進(jìn)的基因編輯技術(shù),CRISPR/Cas9系統(tǒng)為分子細(xì)胞生物學(xué)帶來(lái)革命性發(fā)展,以它的簡(jiǎn)單高效、靈活性以及可實(shí)現(xiàn)DNA序列的定向突變而被廣泛使用.斑馬魚的park2基因位于第13號(hào)染色體上,編碼的Parkin蛋白是一個(gè)E3泛素連接酶.該基因在斑馬魚中的功能還不清楚.利用CRISPR/Cas9系統(tǒng),首次在斑馬魚胚胎中實(shí)現(xiàn)了park2基因的大片段刪除.由于斑馬魚在發(fā)育和疾病研究中有很大優(yōu)勢(shì),實(shí)現(xiàn)park2基因敲除將有助于將來(lái)進(jìn)一步研究該基因的功能. 

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【文章目錄】：
0 引言
1 材料與方法
    1.1 斑馬魚品系及飼養(yǎng)
    1.2 斑馬魚胚胎基因組DNA提取與PCR擴(kuò)增
    1.3 Cas9 mRNA和sgRNA的體外合成與純化
    1.4 斑馬魚胚胎顯微注射
        1.4.1 配魚及受精卵的收集:
        1.4.2 斷針與定量:
        1.4.3 顯微注射:
2 結(jié)果與分析
    2.1 突變park2基因的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
    2.2 Cas9靶點(diǎn)的選擇與優(yōu)化
    2.3 大片段刪除效率檢測(cè)及測(cè)序結(jié)果分析
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Efficient Gene Targeting in Zebrafish Mediated by a Zebrafish-Codon-Optimized Cas9 and Evaluation of Off-Targeting Effect[J]. Da Liu,Zhanxiang Wang,An Xiao,Yutian Zhang,Wenyuan Li,Yao Zu,Shaohua Yao,Shuo Lin,Bo Zhang.  Journal of Genetics and Genomics. 2014(01)



本文編號(hào)：3662184