目的大氣PM_2.5作為空氣污染物之一,與肺癌的發(fā)生發(fā)展有著明顯的關(guān)聯(lián),本研究探討Wnt/β-catenin信號(hào)通路在大氣PM_2.5引起人支氣管上皮細(xì)胞（Beas-2B）、非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞（A549）p16抑癌基因啟動(dòng)子甲基化改變中的關(guān)鍵作用;探討Wnt/β-catenin信號(hào)通路在大氣PM_2.5引起上述兩種細(xì)胞生物行為改變中的作用。分別用正常支氣管上皮細(xì)胞、肺癌細(xì)胞建模進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn),從致癌、促癌兩個(gè)角度研究大氣PM_2.5對(duì)肺癌的相關(guān)分子機(jī)制。方法根據(jù)課題組前期大氣PM_2.5采集方法,采集大氣PM_2.5,干燥、稱重后溶解于DMSO,將其濃度定為100 mg/mL備用。不同濃度大氣PM_2.5染毒Beas-2B、A549細(xì)胞24小時(shí)后,MTT、細(xì)胞劃痕及Transwell實(shí)驗(yàn)確定細(xì)胞染毒濃度;同樣以MTT實(shí)驗(yàn)確定DKK-1抑制劑最佳濃度;Western blot法檢測(cè)經(jīng)不同濃度PM_2.5處理及加入抑制劑DKK-1與PM... 

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
1 前言
2 材料與方法
    2.1 細(xì)顆粒物采樣器材和材料
    2.2 實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備
    2.3 細(xì)胞相關(guān)材料與試劑
    2.4 主要試劑配制方法
    2.5 大氣PM_(2.5) 顆粒物的采集方法
    2.6 細(xì)胞培養(yǎng)
    2.7 細(xì)胞染毒及TGF-β1 孵育
    2.8 細(xì)胞毒性試驗(yàn)（MTT法）
    2.9 Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)A549細(xì)胞體外侵襲力
    2.10 甲基化特異性PCR
    2.11 細(xì)胞蛋白提取定量及Western blot
    2.12 RT-q PCR實(shí)驗(yàn)
    2.13 統(tǒng)計(jì)分析
3 結(jié)果
    3.1 大氣PM_(2.5) 及DKK-1 對(duì)A549細(xì)胞存活率的影響
    3.2 大氣PM_(2.5)對(duì)A549細(xì)胞DNMT1蛋白表達(dá)及p16甲基化狀態(tài)的影響
    3.3 大氣PM_(2.5) 對(duì)A549細(xì)胞遷移力的影響
    3.4 大氣PM_(2.5) 對(duì)A549細(xì)胞侵襲力的影響
    3.5 倒置顯微鏡下觀察不同濃度PM_(2.5) 染毒后細(xì)胞形態(tài)
    3.6 PM_(2.5) 促進(jìn)A549細(xì)胞上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化
    3.7 PM_(2.5) 對(duì)A549細(xì)胞Wnt/β-catenin通路的影響
    3.8 DKK-1 抑制A549細(xì)胞中Wnt/β-catenin信號(hào)通路
    3.9 DKK-1 與PM_(2.5) 共孵育后A549細(xì)胞DNMT1蛋白表達(dá)水平
    3.10 DKK-1 抑制Wnt/β-catenin經(jīng)典信號(hào)通路后A549細(xì)胞中p16甲基化改變
    3.11 DKK-1 與PM_(2.5)共孵育后對(duì)A549細(xì)胞遷移力的改變
    3.12 DKK-1 與PM_(2.5) 共孵育后對(duì)A549細(xì)胞侵襲力的改變
    3.13 DKK-1 與PM_(2.5) 共孵育后A549細(xì)胞EMT蛋白表達(dá)水平
    3.14 大氣PM_(2.5) 及DKK-1 對(duì)Beas-2B細(xì)胞存活率的影響
    3.15 大氣PM_(2.5) 影響B(tài)eas-2B細(xì)胞DNMTs蛋白及m RNA的表達(dá)
    3.16 大氣PM_(2.5) 對(duì)Beas-2B細(xì)胞p16甲基化的影響
    3.17 PM_(2.5) 促進(jìn)TGF-β1 介導(dǎo)的Beas-2B細(xì)胞上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化
    3.18 大氣PM_(2.5) 對(duì)Beas-2B細(xì)胞Wnt/β-catenin通路的影響
    3.19 DKK-1 抑制Beas-2B細(xì)胞Wnt/β-catenin經(jīng)典信號(hào)通路
    3.20 DKK-1 與PM_(2.5) 共孵育后Beas-2B細(xì)胞DNMTs蛋白及m RNA的表達(dá)
    3.21 DKK-1 與PM_(2.5) 共孵育后Beas-2B細(xì)胞p16甲基化改變
    3.22 DKK-1 與PM_(2.5) 共孵育后Beas-2B細(xì)胞上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化水平改變
4 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
綜述
    參考文獻(xiàn)


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]p16與非小細(xì)胞肺癌臨床病理的關(guān)系及5-Aza-CdR對(duì)肺癌A549細(xì)胞中p16表達(dá)的影響[J]. 華叢書,馬冬春,陳海,張朝東,王文生,丁翔,趙健,吳峰.  四川大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2018(03)
[2]基于3種基因啟動(dòng)子甲基化聯(lián)合端粒長度構(gòu)建肺癌篩查神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)模型[J]. 王威,段曉冉,譚善娟,姚永成,吳逸明,吳擁軍.  鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2014(02)
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[4]miR-506通過靶向Slug調(diào)節(jié)上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化對(duì)乳腺癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的抑制作用[J]. 梁永俊,周佽想,宇小婷,趙倩.  上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2012(06)



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