目的大氣PM_2.5作為空氣污染物之一,與肺癌的發(fā)生發(fā)展有著明顯的關(guān)聯(lián),本研究探討Wnt/β-catenin信號通路在大氣PM_2.5引起人支氣管上皮細胞（Beas-2B）、非小細胞肺癌細胞（A549）p16抑癌基因啟動子甲基化改變中的關(guān)鍵作用;探討Wnt/β-catenin信號通路在大氣PM_2.5引起上述兩種細胞生物行為改變中的作用。分別用正常支氣管上皮細胞、肺癌細胞建模進行體外實驗,從致癌、促癌兩個角度研究大氣PM_2.5對肺癌的相關(guān)分子機制。方法根據(jù)課題組前期大氣PM_2.5采集方法,采集大氣PM_2.5,干燥、稱重后溶解于DMSO,將其濃度定為100 mg/mL備用。不同濃度大氣PM_2.5染毒Beas-2B、A549細胞24小時后,MTT、細胞劃痕及Transwell實驗確定細胞染毒濃度;同樣以MTT實驗確定DKK-1抑制劑最佳濃度;Western blot法檢測經(jīng)不同濃度PM_2.5處理及加入抑制劑DKK-1與PM... 

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【學(xué)位級別】：碩士

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中文摘要
Abstract
1 前言
2 材料與方法
    2.1 細顆粒物采樣器材和材料
    2.2 實驗儀器及設(shè)備
    2.3 細胞相關(guān)材料與試劑
    2.4 主要試劑配制方法
    2.5 大氣PM_(2.5) 顆粒物的采集方法
    2.6 細胞培養(yǎng)
    2.7 細胞染毒及TGF-β1 孵育
    2.8 細胞毒性試驗（MTT法）
    2.9 Transwell小室侵襲實驗檢測A549細胞體外侵襲力
    2.10 甲基化特異性PCR
    2.11 細胞蛋白提取定量及Western blot
    2.12 RT-q PCR實驗
    2.13 統(tǒng)計分析
3 結(jié)果
    3.1 大氣PM_(2.5) 及DKK-1 對A549細胞存活率的影響
    3.2 大氣PM_(2.5)對A549細胞DNMT1蛋白表達及p16甲基化狀態(tài)的影響
    3.3 大氣PM_(2.5) 對A549細胞遷移力的影響
    3.4 大氣PM_(2.5) 對A549細胞侵襲力的影響
    3.5 倒置顯微鏡下觀察不同濃度PM_(2.5) 染毒后細胞形態(tài)
    3.6 PM_(2.5) 促進A549細胞上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化
    3.7 PM_(2.5) 對A549細胞Wnt/β-catenin通路的影響
    3.8 DKK-1 抑制A549細胞中Wnt/β-catenin信號通路
    3.9 DKK-1 與PM_(2.5) 共孵育后A549細胞DNMT1蛋白表達水平
    3.10 DKK-1 抑制Wnt/β-catenin經(jīng)典信號通路后A549細胞中p16甲基化改變
    3.11 DKK-1 與PM_(2.5)共孵育后對A549細胞遷移力的改變
    3.12 DKK-1 與PM_(2.5) 共孵育后對A549細胞侵襲力的改變
    3.13 DKK-1 與PM_(2.5) 共孵育后A549細胞EMT蛋白表達水平
    3.14 大氣PM_(2.5) 及DKK-1 對Beas-2B細胞存活率的影響
    3.15 大氣PM_(2.5) 影響B(tài)eas-2B細胞DNMTs蛋白及m RNA的表達
    3.16 大氣PM_(2.5) 對Beas-2B細胞p16甲基化的影響
    3.17 PM_(2.5) 促進TGF-β1 介導(dǎo)的Beas-2B細胞上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化
    3.18 大氣PM_(2.5) 對Beas-2B細胞Wnt/β-catenin通路的影響
    3.19 DKK-1 抑制Beas-2B細胞Wnt/β-catenin經(jīng)典信號通路
    3.20 DKK-1 與PM_(2.5) 共孵育后Beas-2B細胞DNMTs蛋白及m RNA的表達
    3.21 DKK-1 與PM_(2.5) 共孵育后Beas-2B細胞p16甲基化改變
    3.22 DKK-1 與PM_(2.5) 共孵育后Beas-2B細胞上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化水平改變
4 討論
結(jié)論
參考文獻
附錄
致謝
綜述
    參考文獻


【參考文獻】：
期刊論文
[1]p16與非小細胞肺癌臨床病理的關(guān)系及5-Aza-CdR對肺癌A549細胞中p16表達的影響[J]. 華叢書,馬冬春,陳海,張朝東,王文生,丁翔,趙健,吳峰.  四川大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2018(03)
[2]基于3種基因啟動子甲基化聯(lián)合端粒長度構(gòu)建肺癌篩查神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)模型[J]. 王威,段曉冉,譚善娟,姚永成,吳逸明,吳擁軍.  鄭州大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2014(02)
[3]DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶及DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑在腫瘤研究中的新視角[J]. 李明,宋永勝,吳斌,卜仁戈.  癌癥進展. 2012(06)
[4]miR-506通過靶向Slug調(diào)節(jié)上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化對乳腺癌細胞侵襲和轉(zhuǎn)移的抑制作用[J]. 梁永俊,周佽想,宇小婷,趙倩.  上海交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2012(06)



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