中度嗜鹽菌（Halophilic bacteria）泛指能夠在3%-15%的Na Cl存在時表現(xiàn)出最適生長的微生物類群。中度嗜鹽菌與一般的非嗜鹽性細菌相比較,具有特殊的代謝途徑、生理生化結(jié)構(gòu)、以及獨特的遺傳學特性。喜鹽芽孢桿菌（Halobacillus sp.）NEAU-ST10-40是本實驗室從安達市分離得到的一株中度嗜鹽菌,并已經(jīng)鑒定該菌株代表喜鹽芽孢桿菌屬（Halobacillus）的一個新種,并將其命名為安達喜鹽芽孢桿菌（Halobacillus andaensis）模式菌株NEAU-ST10-40T。本實驗采用大腸桿菌（Escherichia coli）缺陷株KNabc（Δnha A,Δnha B,Δcha A）基因功能互補法和基因文庫篩選法,從NEAU-ST10-40T中克隆得到1個能夠使大腸桿菌（E.coli）KNabc在0.3MNa Cl的LBK培養(yǎng)基上生長的重組子。此重組子在M13F方向的序列分析顯示,該重組子包含的外源基因片段長4442 bp,該片段含有4個開放閱讀框（ORF1-4）以及各自的SD序列和推測的啟動子序列。其中有3個完整的開放閱讀框（ORF2-4）,O... 

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
英文摘要
1 前言
    1.1 中度嗜鹽菌的嗜鹽機理
        1.1.1 相容性溶質(zhì)
        1.1.2 Na~+/H~+逆向轉(zhuǎn)運蛋白
    1.2 中度嗜鹽菌的研究
    1.3 喜鹽芽孢桿菌NEAU-ST10-40~T
    1.4 UPF0118家族蛋白
    1.5 論文研究的目標及研究內(nèi)容
        1.5.1 研究目標
        1.5.2 研究內(nèi)容
2 材料與方法
    2.1 喜鹽芽孢桿菌NEAU-ST10-40T中相關(guān)基因的克隆
        2.1.1 實驗所需材料
        2.1.2 實驗方法
    2.2 外源基因片段的測序及序列分析
    2.3 外源基因的功能研究
        2.3.1 材料
        2.3.2 方法
    2.4 表達載體pET28b-UPF0118，pET22b-UPF0118的構(gòu)建
        2.4.1 材料
        2.4.2 方法
    2.5 pET22b-UPF0118的表達及Western blot實驗
        2.5.1 材料
        2.5.2 方法
3 結(jié)果與分析
    3.1 喜鹽芽孢桿菌NEAU-ST10-40~T鈉離子輸出相關(guān)基因的克隆
        3.1.1 基因組DNA的部分酶切
        3.1.2 陽性克隆的篩選
    3.2 外源基因的測序及序列分析
        3.2.1 KNabc/p UC-DP61攜帶的外源基因的測序及序列分析
        3.2.2 UPF0118的亞克隆與耐鹽堿測試
    3.3 反轉(zhuǎn)膜活性的測定
        3.3.1 E.coli KNabc中陽離子/H~+逆向轉(zhuǎn)運活性的測定結(jié)果
        3.3.2 pH值范圍（pH profile）的測定結(jié)果
        3.3.3 K_(0.5)值的測定結(jié)果
    3.4 重組表達載體pET-22b-UPF0118的構(gòu)建和表達
        3.4.1 重組表達載體pET-22b-UPF0118的構(gòu)建
        3.4.2 重組表達載體pET-22b-UPF0118在大腸桿菌中的誘導表達
4 討論
5 結(jié)論
致謝
參考文獻
攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術(shù)論文


【參考文獻】：
期刊論文
[1]中度嗜鹽菌的研究進展[J]. 任培根,周培瑾.  微生物學報. 2003(03)



本文編號：3650191