目的:檢測肝癌動物模型組織和肝癌細胞中PIWI/piRNA通路相關(guān)Piwil4、Piwil2、Mael、Ddx4基因mRNA和蛋白的表達水平變化,探討PIWI/piRNA通路基因與肝癌的關(guān)系;將肝癌細胞系中Piwil4基因進行敲除,構(gòu)建基因敲除的細胞系,檢測Piwil4的表達、敲除細胞系的凋亡水平、細胞增殖能力,探討PIWIL4對肝癌細胞凋亡和增殖能力的影響。方法:（1）大鼠肝癌動物模型的建立及應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）技術(shù)檢測腫瘤標(biāo)記物在模型動物血清中的水平變化。（2）釆用qRT-PCR、Western-blot和免疫組織化學(xué)法檢測肝癌動物模型肝臟組織PIWI/piRNA通路相關(guān)基因Piwil2、Piwil4、Mael和Ddx4的mRNA及蛋白表達水平變化。（3）大鼠肝癌細胞（CBRH-7919）和大鼠正常肝細胞（BRL）體外培養(yǎng),用qRT-PCR和Western-blot法檢測PIWI/piRNA通路相關(guān)基因Piwil2、Piwil4、Mael和Ddx4的mRNA和蛋白表達水平變化。（4）利用CRISPR/Cas9技術(shù)對CBRH-7919細胞的Piwil4基因進行敲除,應(yīng)用We... 

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

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結(jié) 果1 大鼠肝癌模型建立及 Piwil2、Piwil4、Mael、Ddx4 基因表達水平1.1 各組肝組織病理形態(tài)特征成功建立大鼠肝癌模型，正常對照組大鼠肝組織細胞結(jié)構(gòu)完整，肝細胞排列規(guī)則，呈索狀，肝細胞呈多邊形，胞漿均勻，細胞核形態(tài)正常，無異常變化。肝小葉結(jié)構(gòu)正常，未見纖維間隔，未見細胞水腫，未見壞死肝細胞（圖 2A）。肝癌模型組大鼠肝細胞呈多角形，異型性明顯，胞漿豐富，嗜酸性，核大，圓形有清楚的核仁。分化差異癌細胞異型性明顯，常有巨核及多核瘤細胞。癌細胞排列成條索狀、巢狀或呈腺管樣，周圍有血管內(nèi)皮包繞（圖 2 B）。

新疆醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 肝癌模型組織中 Piwil2、Piwil4、Mael 和 Ddx4 mRNA化擴增曲線中（圖 4A、C、E、G、I）可見所有樣品均已進入平臺期，說明。溶解曲線中（圖 4B、D、F、H、J）可見都是單峰，未見雜峰，擴增產(chǎn)基因所選的熒光定量 PCR 引物具有特異性。結(jié)果用 2-△△Ct表示。

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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