靈芝酸是靈芝產的一種有30個碳原子的四環(huán)三萜類化合物,研究表明靈芝酸具有抗HIV和抗腫瘤等多種藥理學活性。靈芝酸具有兩種不同的化學結構。其中,Ⅰ型靈芝酸的羊毛甾醇骨架上只有一個單雙鍵結構,而Ⅱ型靈芝酸的羊毛甾醇骨架上含有兩個共軛雙鍵。目前,菌絲體液體培養(yǎng)靈芝細胞是一種可以有效生產靈芝酸的方法。由于液體培養(yǎng)靈芝細胞生產的靈芝酸產量較低,限制了靈芝酸的商業(yè)化生產和臨床應用,因此進一步提高靈芝中靈芝酸的產量具有重要意義。本文中,我們將整合發(fā)酵策略和基因工程改造應用到了提高靈芝菌絲體發(fā)酵生產單體靈芝酸中。我們研究了在液體靜置培養(yǎng)靈芝細胞中整合表達透明顫菌血紅蛋白（VHb）和鈣離子添加策略下靈芝酸的生物合成情況。結果顯示,整合策略下五種單體靈芝酸GA-O,-Mk,-T,-S和-Me的最大產量分別為1451.33±67.50,179.66±5.06,1320.59±20.84,1431.23±79.74和1283.81±85.13?g/100 mg細胞干重,這些產量分別為靜置培養(yǎng)條件下野生型菌株（對照）中各單體靈芝酸含量的2.66,2.50,2.52,3.50和5.98倍。整合策略下單體靈芝酸GA... 

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 高等藥用真菌
    1.2 靈芝及其生物活性成分
    1.3 靈芝酸結構、種類及其藥理活性
    1.4 靈芝酸的生物合成
    1.5 靈芝酸的發(fā)酵生產
    1.6 整合發(fā)酵策略與基因工程在提高次級代謝產物產量中的應用
    1.7 靈芝酸的多樣性
    1.8 立題的目的和意義
    1.9 本文的主要研究內容與技術路線
第二章 在VHb靈芝工程菌株中整合液體靜置培養(yǎng)和鈣離子添加策略對靈芝酸生物合成的影響
    2.1 引言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 菌種及培養(yǎng)
        2.2.2 靈芝細胞生物量以及培養(yǎng)基中殘?zhí)堑暮繙y定
        2.2.3 靈芝酸單體的提取與含量測定
        2.2.4 中間代謝產物鯊烯和羊毛甾醇的提取與檢測
        2.2.5 靈芝酸生物合成相關基因hmgr,fps,sqs和cyp-5150l8表達水平的檢測
        2.2.6 數(shù)據(jù)處理與分析方法
    2.3 實驗結果
        2.3.1 靜置培養(yǎng)條件下VHb的表達對靈芝酸產量的影響
        2.3.2 整合策略下靈芝酸的生物合成
        2.3.3 整合策略對中間代謝產物鯊烯和羊毛甾醇積累量的影響
        2.3.4 整合策略下靈芝酸生物合成相關基因hmgr,fps,sqs和cyp-5150l8表達水平
    2.4 討論
    2.5 本章小結
第三章 靜置培養(yǎng)條件下VHb表達對Ⅰ型與Ⅱ型靈芝酸分布的影響
    3.1 引言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 靜置培養(yǎng)條件下VHb表達對靈芝酸產量影響
        3.2.2 細胞色素P450基因A2,V2和A13表達水平的檢測
        3.2.3 數(shù)據(jù)處理與分析方法
    3.3 實驗結果
        3.3.1 靜置培養(yǎng)條件下VHb表達對Ⅰ型和Ⅱ型靈芝酸比例的影響
        3.3.2 靜置培養(yǎng)條件下VHb表達對P450基因A2,V2和A13轉錄水平的影響
    3.4 討論
    3.5 本章小結
第四章 結論與展望
    4.1 全文結論
    4.2 展望
    4.3 文章創(chuàng)新點
致謝
參考文獻
附錄A 攻讀碩士期間發(fā)表的論文
附錄B 標準曲線


【參考文獻】：
期刊論文
[1]靈芝三萜類化合物藥理作用研究進展[J]. 羅俊,林志彬.  藥學學報. 2002(07)
[2]靈芝三萜類成分在體內外對小鼠免疫性肝損傷的影響[J]. 王明宇,林志彬.  中國藥學雜志. 2000(12)
[3]人工紫芝的抗炎鎮(zhèn)痛作用研究[J]. 萬阜昌,黃道齋.  中國中藥雜志. 1992(10)

碩士論文
[1]抗腫瘤活性化合物靈芝酸T高效制備方法的研究[D]. 王家樂.上海交通大學 2011



本文編號：3648343