家蠶作為鱗翅目昆蟲的代表,具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。家蠶生長(zhǎng)發(fā)育過程會(huì)受到各種病原微生物的威脅,其中家蠶核型多角體病毒（Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV）引起的家蠶病毒病占蠶病的70%,對(duì)蠶業(yè)生產(chǎn)造成了嚴(yán)重影響。圍食膜（PM）是昆蟲抵抗外源病源微生物入侵的第一道防線,圍食膜因子與外源病原微生物入侵昆蟲中腸細(xì)胞存在密切關(guān)系。研究家蠶圍食膜因子在幼蟲感染BmNPV過程中的功能,可為抗性育種和害蟲防治提供新的基因資源和理論依據(jù)。本文以家蠶圍食膜因子基因Bm011851為研究對(duì)象,克隆并分析了家蠶圍食膜因子基因Bm011851,獲得并檢測(cè)了過表達(dá)Bm011851轉(zhuǎn)基因家蠶幼蟲的生長(zhǎng)發(fā)育、經(jīng)濟(jì)性狀及其對(duì)PM表面結(jié)構(gòu)的影響,研究了Bm011851在BmNPV感染家蠶幼蟲過程中的功能,以解析Bm011851參與抵抗病毒入侵的機(jī)制。主要研究結(jié)果如下:1.家蠶圍食膜因子基因Bm011851的克隆及表達(dá)分析基因表達(dá)分析顯示Bm011851在家蠶幼蟲期表達(dá),進(jìn)食期表達(dá)量高于眠期,5齡時(shí)表達(dá)量達(dá)到最高水平,5齡6天后表達(dá)量開始下降;Bm011851在中腸中高量表達(dá),且中部... 

【文章來源】：西南大學(xué)重慶市211工程院校教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 昆蟲桿狀病毒概述
        1.1.1 桿狀病毒的類型
        1.1.2 桿狀病毒的生活史
        1.1.3 桿狀病毒感染昆蟲宿主的途徑
    1.2 昆蟲圍食膜概述
        1.2.1 昆蟲圍食膜的類型
        1.2.2 昆蟲圍食膜的組成和結(jié)構(gòu)
        1.2.3 昆蟲圍食膜的功能
    1.3 外源病原體入侵對(duì)昆蟲圍食膜的影響
        1.3.1 降解圍食膜幾丁質(zhì)
        1.3.2 改變圍食膜蛋白組分
        1.3.3 破壞圍食膜中蛋白質(zhì)與幾丁質(zhì)的結(jié)合
        1.3.4 影響圍食膜的其他方式
    1.4 昆蟲圍食膜因子概述
        1.4.1 圍食膜因子的特點(diǎn)
        1.4.2 圍食膜因子的分類
        1.4.3 圍食膜因子的功能
        1.4.4 圍食膜因子基因的研究進(jìn)展
第2章 引言
    2.1 研究背景
    2.2 目的及意義
    2.3 研究主要內(nèi)容
    2.4 技術(shù)路線
第3章 家蠶圍食膜因子基因Bm011851的克隆及表達(dá)分析
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料及試劑
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 主要儀器
        3.1.3 主要試劑
        3.1.4 實(shí)驗(yàn)主要試劑配方
        3.1.5 分析工具
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 家蠶幼蟲不同時(shí)期中腸及不同組織cDNA材料制備
        3.2.2 家蠶圍食膜因子基因Bm011851的克隆與表達(dá)
        3.2.3 家蠶Bm011851基因的生物信息學(xué)分析
        3.2.4 家蠶幼蟲食下感染BmNPV后 Bm011851 基因表達(dá)
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        3.3.1 家蠶圍食膜因子Bm011851的序列特征
        3.3.2 家蠶圍食膜因子Bm011851的時(shí)空表達(dá)
        3.3.3 家蠶幼蟲食下感染BmNPV后 Bm011851 基因表達(dá)
    3.4 討論
第4章 過表達(dá)Bm011851轉(zhuǎn)基因家蠶的獲得
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料及試劑
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.2 主要儀器
        4.1.3 主要試劑
        4.1.4 實(shí)驗(yàn)主要試劑配方
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 家蠶圍食膜因子Bm011851過表達(dá)轉(zhuǎn)基因載體構(gòu)建
        4.2.2 重組載體顯微注射家蠶胚胎
        4.2.3 轉(zhuǎn)基因家蠶陽(yáng)性個(gè)體的篩選
        4.2.4 轉(zhuǎn)基因家蠶陽(yáng)性個(gè)體基因組的提取
        4.2.5 轉(zhuǎn)基因家蠶陽(yáng)性個(gè)體cDNA的獲得
        4.2.6 轉(zhuǎn)基因家蠶陽(yáng)性個(gè)體的圍食膜因子基因表達(dá)
        4.2.7 轉(zhuǎn)基因家蠶陽(yáng)性個(gè)體的經(jīng)濟(jì)性狀調(diào)查
        4.2.8 掃描電鏡觀察轉(zhuǎn)基因家蠶陽(yáng)性個(gè)體的圍食膜表面結(jié)構(gòu)
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        4.3.1 過表達(dá)Bm011851轉(zhuǎn)基因家蠶的獲得及鑒定
        4.3.2 過表達(dá)Bm011851轉(zhuǎn)基因家蠶的主要經(jīng)濟(jì)性狀
        4.3.3 過表達(dá)Bm011851基因?qū)倚Q圍食膜表面結(jié)構(gòu)的影響
        4.3.4 過表達(dá)Bm011851轉(zhuǎn)基因家蠶中其他圍食膜因子基因的表達(dá)
    4.4 討論
第5章 Bm011851 基因在抵抗BmNPV入侵過程的功能研究
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料及試劑
        5.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.2 主要儀器
        5.1.3 主要試劑
        5.1.4 實(shí)驗(yàn)主要試劑配方
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 BmNPV的收集及純化
        5.2.2 轉(zhuǎn)基因家蠶感染BmNPV半致死劑量調(diào)查
        5.2.3 轉(zhuǎn)基因家蠶經(jīng)口感染BmNPV后基因轉(zhuǎn)錄分析
        5.2.4 轉(zhuǎn)基因家蠶感染BmNPV后圍食膜表面結(jié)構(gòu)觀察
        5.2.5 轉(zhuǎn)基因家蠶感染BmNPV后幼蟲中腸材料的制備
        5.2.6 家蠶感染BmNPV后中腸組織石蠟切片的材料處理
        5.2.7 中腸組織石蠟切片的制備及染色
    5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        5.3.1 轉(zhuǎn)基因家蠶經(jīng)口感染BmNPV后的存活率
        5.3.2 轉(zhuǎn)基因家蠶經(jīng)口感染BmNPV后半致死劑量
        5.3.3 轉(zhuǎn)基因家蠶經(jīng)口感染BmNPV后病毒的增值復(fù)制
        5.3.4 轉(zhuǎn)基因家蠶經(jīng)口感染BmNPV后圍食膜表面結(jié)構(gòu)變化
        5.3.5 轉(zhuǎn)基因家蠶經(jīng)口感染BmNPV后家蠶中腸組織細(xì)胞變化
    5.4 討論
第6章 全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
附錄
在讀期間發(fā)表的論文及參加的課題
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]家蠶金屬羧肽酶基因家族的鑒定與表達(dá)分析[J]. 朱玉蘋,韓民錦,查緒樂,陳瑜,沈以紅.  蠶業(yè)科學(xué). 2016(03)
[2]昆蟲體內(nèi)的天然屏障——圍食膜[J]. 姜姍彤,毛浪勇,劉曉勇,姚勤,陳克平.  生物學(xué)雜志. 2012(04)
[3]標(biāo)記回收法確認(rèn)我國(guó)北方地區(qū)草地螟的遷飛[J]. 陳陽(yáng),姜玉英,劉家驤,呂英,孟正平,陳靜,唐繼洪.  昆蟲學(xué)報(bào). 2012(02)
[4]光增白劑M2R對(duì)草地螟中腸圍食膜的影響及對(duì)Bt毒力的增效作用[J]. 尹姣,郭巍,李克斌,曹雅忠.  昆蟲學(xué)報(bào). 2009(07)
[5]家蠶病毒病及防控對(duì)策[J]. 楊先宏,楊榮貴.  云南農(nóng)業(yè)科技. 2009(S1)
[6]鞘翅目害蟲-華北大黑鰓金龜圍食膜結(jié)構(gòu)的初步研究[J]. 李帥,李淑文,李長(zhǎng)友,周洪旭,李國(guó)勛.  華北農(nóng)學(xué)報(bào). 2008(04)
[7]昆蟲圍食膜的研究概況[J]. 謝玉英,李緒友.  湖北生態(tài)工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報(bào). 2007(02)
[8]昆蟲圍食膜的研究進(jìn)展[J]. 相靜波,劉惠霞,吳文君.  昆蟲知識(shí). 2004(02)
[9]光增白劑對(duì)甜菜夜蛾圍食膜結(jié)構(gòu)的作用與影響[J]. 朱蓉,彭建新,洪華珠.  昆蟲學(xué)報(bào). 2003(04)
[10]昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)研究進(jìn)展及其應(yīng)用展望[J]. 朱江,吳祥甫.  蠶業(yè)科學(xué). 2003(02)

博士論文
[1]病原微生物黑胸?cái)⊙挎邨U菌（Bacillus bombyseptieus）等誘導(dǎo)家蠶（Bombyx mori）全基因組寄主應(yīng)答研究[D]. 黃璐琳.西南大學(xué) 2010

碩士論文
[1]家蠶圍食膜因子鑒定及其在BmNPV入侵中的功能研究[D]. 查緒樂.西南大學(xué) 2017
[2]家蠶腸粘蛋白基因的鑒定及功能分析[D]. 夏丹丹.西南大學(xué) 2015
[3]BmNPV病毒感染后家蠶中腸圍食膜蛋白質(zhì)的變化[D]. 陳艷萍.西南大學(xué) 2014
[4]BmNPV感染對(duì)家蠶幼蟲中腸圍食膜的影響[D]. 劉博.西南大學(xué) 2012



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