靈芝屬真菌具有重要的經(jīng)濟(jì)價值,很多種類是重要的藥用真菌,而有些種類是重要的林木病原真菌,能夠引起林木腐朽病害。在靈芝屬系統(tǒng)學(xué)研究中,ITS作為真菌的通用DNA條形碼被廣泛應(yīng)用,而EF1-α及RPB2基因在用于分子鑒定研究中具有更高的特異性,然而這些基因直接測序有時會出現(xiàn)雙峰或雜合現(xiàn)象,在這些基因片段上可能存在一定的核苷酸多態(tài)性,而擴(kuò)大種內(nèi)的變異。本研究利用ITS,EF1-αα和RPB2基因?qū)?08份靈芝屬標(biāo)本進(jìn)行PCR擴(kuò)增和直接測序,對挑選出存在雜合或雙峰現(xiàn)象的36份標(biāo)本進(jìn)行克隆和測序,挑選至少30個克隆子,所得序列比對后,對其樣品內(nèi)、樣品間、種內(nèi)的核苷酸多態(tài)性進(jìn)行分析,進(jìn)一步評估靈芝屬三個基因片段的種內(nèi)和種間變異范圍,篩選出能夠?qū)`芝屬物種有效區(qū)分的DNA條形碼。在PCR擴(kuò)增和測序結(jié)果中,ITS基因中出現(xiàn)雜合或雙峰現(xiàn)象的標(biāo)本數(shù)量最多可達(dá)148份（29.13%）,測序成功率僅有69.96%,而EF1-α和RPB2基因的雜合率分別為11.22%和5.71%,其測序成功率分別為87.55%和88.74%。序列核苷酸多態(tài)性分析后發(fā)現(xiàn),靈芝屬的ITS,EF1-α和RPB2序列中存在核苷酸多態(tài)性... 

【文章來源】：北京林業(yè)大學(xué)北京市211工程院校教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRCT
引言
1. 文獻(xiàn)綜述
    1.1 DNA條形碼及應(yīng)用于靈芝屬物種多樣性研究現(xiàn)狀
        1.1.1 DNA條形碼
        1.1.2 DNA條形碼應(yīng)用于靈芝屬物種鑒定和多樣性研究現(xiàn)狀
    1.2 常用DNA條形碼基因樣品內(nèi)核苷酸的多態(tài)性研究現(xiàn)狀:
    1.3 本研究目的和意義
    1.4 本研究創(chuàng)新點(diǎn)和技術(shù)路線
2. 材料與方法
    2.1 研究標(biāo)本
    2.2 主要儀器及型號
    2.3 主要試劑
    2.4 主要溶液的配制
    2.5 主要軟件
    2.6 實驗方法
        2.6.1 子實體基因組DNA的提取
        2.6.2 基因組DNA的瓊脂糖凝膠電泳檢測
        2.6.3 PCR擴(kuò)增
        2.6.4 PCR產(chǎn)物檢測及測序
        2.6.5 克隆測序
        2.6.6 序列比對及多態(tài)性分析
        2.6.7 序列種內(nèi)種間差異分析
3. 實驗結(jié)果
    3.1 DNA條形碼的PCR擴(kuò)增和測序
    3.2 常用DNA條形碼核苷酸多態(tài)性分析
        3.2.1 ITS核苷酸序列多態(tài)性分析
            3.2.1.1 ITS序列樣品內(nèi)和樣品間多態(tài)性
            3.2.1.2 ITS序列種內(nèi)多態(tài)性分析
            3.2.1.3 ITS序列種間多態(tài)性
            3.2.1.4 小結(jié)和討論
        3.2.2. EF1-α序列核苷酸多態(tài)性分析
            3.2.2.1 EF1-α序列樣品內(nèi)和樣品間多態(tài)性
            3.2.2.2 EF1-α序列種內(nèi)多態(tài)性
            3.2.2.3 EF1-α序列種間多態(tài)性
            3.2.2.4 小結(jié)和討論
        3.2.3 RPB2核苷酸序列多態(tài)性分析
            3.2.3.1 RPB2序列樣品內(nèi)和樣品間多態(tài)性
            3.2.3.2 RPB2序列種內(nèi)多態(tài)性分析
            3.2.3.3 RPB2序列種間多態(tài)性
            3.2.3.4 小結(jié)和討論
    3.3. 靈芝屬DNA條形碼的種內(nèi)和種間差異分析
        3.3.1 靈芝屬DNA條形碼的種內(nèi)差異
        3.3.2 靈芝屬DNA條形碼的種間差異
4 結(jié)果與討論
    4.1 結(jié)論
    4.2 討論
參考文獻(xiàn)
個人簡歷
導(dǎo)師簡歷
獲得成果目錄
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[9]靈芝盆景造型新技術(shù)[J]. 林佳,李昌發(fā),唐利華.  食用菌. 2015(04)
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博士論文
[1]新疆野生羊肚菌分子系統(tǒng)學(xué)和遺傳多樣性研究[D]. 武冬梅.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015



本文編號：3612093