植物在生長發(fā)育過程中會遭受對其產(chǎn)生不利影響的生物脅迫和非生物脅迫。干旱、鹽、堿等非生物脅迫會引起植物體內(nèi)極其復(fù)雜的分子反應(yīng)。泛素/26S蛋白酶體途徑（UPP）是細胞內(nèi)高效的、有高度選擇特性的蛋白降解途徑。RING型E3泛素連接酶在UPP中種類最多,它在底物的特異性選擇降解過程中起關(guān)鍵作用。研究表明有RING型E3泛素連接酶基因參與對不同非生物脅迫的應(yīng)答,本研究以圓葉牽牛為試驗材料,克隆出RING型E3泛素連接酶基因PnLOG2,對該基因的表達模式和功能進行了初步探究,旨在為闡明RING型E3泛素連接酶參與植物非生物脅迫的機理提供理論依據(jù)。本研究結(jié)果如下:（1）從圓葉牽牛（Ipomoea purpurea Lam.）中同源克隆出RING型E3泛素連接酶基因PnLOG2,全長為1022 bp。經(jīng)生物信息學(xué)分析,預(yù)測其開放閱讀框長度為941 bp（51-992 bp）,共編碼313個氨基酸殘基,為可溶性非跨膜蛋白,不存在信號肽及導(dǎo)肽,與番茄親緣關(guān)系最近,與其同源性較高的序列中都含有保守的zf-C3HC4型RING-Ubox超家族結(jié)構(gòu)域,啟動子區(qū)順式作用原件分析結(jié)果表明其可能參與非生物脅迫。（... 

【文章來源】：哈爾濱師范大學(xué)黑龍江省

【文章頁數(shù)】：84 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

滲透脅迫與ABA信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑(zhuetal，2016)

SOS通路圖示(Mahajanetal，2008)

第2章牽牛PnLOG2基因克隆及生物信息學(xué)分析17運用SOPMA(https://npsa-prabi.ibcp.fr/cgi-bin/npsa_automat.pl?page=/NPSA/npsa_sopma.html)網(wǎng)站，SOPMA構(gòu)象種類選擇3類，輸入序列，其他參數(shù)默認，預(yù)測蛋白二級結(jié)構(gòu)。(3)蛋白三級結(jié)構(gòu)的預(yù)測利用SWISS-MODEL(http://swissmodel.expasy.org/)在線的同源建模軟件，選擇AutomatedMode開始建模，輸入FASTA、Clustal等格式的序列，輸入標題和郵箱，運行尋找模板，在得到模版后，選擇最佳的模板進行建模，并輸出PDB文件。并用SAVE(http://services.mbi.ucla.edu/SAVES/)在線軟件中的ERRAT、VERIFY3D和PROCHECK對模型進行檢測，將從SWISS-MODEL網(wǎng)站中得到的PDB文件輸入SAVE網(wǎng)站進行檢測并得出Ramachandran圖。2.3結(jié)果與分析2.3.1植物總RNA提取從圓葉牽牛(IpomoeapurpureaLam.)中提取總RNA進行電泳檢測，結(jié)果如圖2-1，可見兩條清晰明亮的帶，這兩條帶分別為28S和18S，其中28S的亮度達到了18S亮度的兩倍以上，確定RNA質(zhì)量符合要求，可以用于后續(xù)實驗。圖2-1圓葉牽�？俁NA提取Figure2-1TotalRNAextractionofmorninggloryM：DL2000Marker；1-2：圓葉牽�？俁NAM:DL2000Marker;1-2;TotalRNAroundleafmorningglory圖2-2PnLOG2基因PCR擴增電泳圖Figure2-2PnLOG2genePCRamplificationelectrophoresisfigureM：DL2000Marker；1-2：PnLOG2基因PCR產(chǎn)物M:DL2000Marker;1-2;PnLOG2genePCRofproduct

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3612621