褐藻膠裂解酶是一種能以β-消去方式催化褐藻膠裂解的酶,已經(jīng)從多種生物中分離獲得。褐藻膠裂解酶在底物特異性、作用方式、酶分子一級(jí)結(jié)構(gòu)和酶分子空間結(jié)構(gòu)具有不同的特征,根據(jù)這些特征,褐藻膠裂解酶被分到了不同的組。褐藻膠是褐藻中含量最豐富的多糖,約占褐藻干重的40%,這種多糖由β-D-甘露糖醛酸（M）和α-L-古洛糖醛酸（G）兩種單體組成,單體間通過(guò)β-1,4糖苷鍵相連�？梢孕纬啥嗑郐�-D-甘露糖醛酸（ployM）、多聚α-L-古洛糖醛酸（ployG）和交替連接的ployGM。褐藻膠寡糖是褐藻膠經(jīng)褐藻膠裂解酶或者物理化學(xué)方法去多聚化形成的產(chǎn)物,在食品和醫(yī)藥行業(yè)具有廣泛的應(yīng)用。褐藻膠裂解酶裂解褐藻膠具有高效和高特異性的特點(diǎn),因此褐藻膠裂解酶一直是各領(lǐng)域的焦點(diǎn)。本研究對(duì)實(shí)驗(yàn)室保存的一株能夠降解褐藻膠的菌株進(jìn)行了種屬鑒定,其16S rDNA序列分析結(jié)果及系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)的分析結(jié)果表明該菌株屬于Vibrio sp.,并命名為Vibrio sp.QD-5。對(duì)該菌株進(jìn)行了全基因組測(cè)序,基因簇分析結(jié)果表明,在菌株Vibrio sp.QD-5的基因組中存在一簇褐藻膠裂解酶基因。利用設(shè)計(jì)的引物克隆出了兩個(gè)基因aly-... 

【文章來(lái)源】：自然資源部第一海洋研究所山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：101 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

褐藻膠的單糖組分，D-甘露糖醛酸（左）和L-古洛糖醛酸（右）

2圖1-2 多聚甘洛糖醛酸（上）和多聚古洛糖醛酸（下）的鏈的構(gòu)型Figure1-2 Chain conformations of poly D-mannuronate (Top) and poly L-guluronate(Bottom).1.1.2 褐藻膠的理化性質(zhì)褐藻膠是褐藻酸與多種金屬離子形成的鹽，褐藻酸不溶于水和乙醇，褐藻膠及其衍生物是水溶性的(Ravanal M C et al.,2016)。應(yīng)用最廣泛的是褐藻酸鈉和褐藻酸鈣。褐藻酸鈉是一種不凝固的、黏稠的親水性膠體，不溶于乙醇和丙酮等有機(jī)溶劑，淀粉可以使褐藻酸鈉的黏稠度增加（Zhu B et al.,2015）。褐藻酸鹽的溶解性和粘度跟其所在的溶液的pH值有關(guān)，pH增加，溶解度也會(huì)隨之增加。當(dāng)溶液的pH<3時(shí),海藻酸鹽會(huì)析出；當(dāng)pH>5.8時(shí)，褐藻酸鹽在水中的溶解度增加；當(dāng)5.8<pH<11.5時(shí)，褐藻酸鹽溶液呈現(xiàn)均勻的透明狀；當(dāng)pH>11.5時(shí)

7圖1-3 褐藻膠裂解酶降解褐藻膠的作用方式（OchiaiA2010）Figure1-3 Alginate degradation by endotype(A) and exotype (B) alginate lyases.20-35 ku（Matsubara Y et al., 2000）（Momma K et al., 2000）（Wong T Y et al.,2000）、40 ku和60 ku（Boyd A et al.,1993）三類(lèi)。（4）根據(jù)褐藻膠裂解酶的氨基酸組成和酶分子空間結(jié)構(gòu)的特征將酶分到7個(gè)多糖裂解酶（polysaccharide lyase，PLs）家族中。屬于褐藻膠裂解酶的多糖裂解酶家族有PL-5、PL-6、PL-7、PL-14、PL-15、PL-17和PL-18（王林娜，2014）。大多數(shù)的褐藻膠裂解酶屬于PL-5和PL-7家族；PL-5家族的褐藻膠裂解酶多為polyM特異性的酶；PL-7家族褐藻膠裂解酶的性質(zhì)較為復(fù)雜；PL-14家族的褐藻膠裂解酶主要來(lái)自于海洋動(dòng)物；PL-15和PL-17兩個(gè)家族的褐藻膠裂解酶具有相似性；PL-18家族和褐藻膠裂解酶多為雙功能酶（Wong TY et al.,2000）。1.4.3 褐藻膠裂解酶的分子結(jié)構(gòu)褐藻膠裂解酶屬于多糖裂解酶，以非水解的方式裂解糖苷鍵，具有特定的空間結(jié)構(gòu)，分布在7個(gè)多糖裂解酶家族中。PL-5家族中有7個(gè)褐藻膠裂解酶的空間結(jié)構(gòu)被獲得（圖1-4），它們的三維結(jié)構(gòu)都具有α/α套筒結(jié)構(gòu)，其中有兩個(gè)分離自Pseudomonas aeruginosa PAO1，其余的分離自Sphingomonas sp. A1。PL-5家族的褐藻膠裂解酶大多會(huì)形成裂縫狀的催化腔

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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[2]海洋細(xì)菌Shewanella sp.Kz7的寡褐藻膠裂解酶研究[D]. 王林娜.中國(guó)海洋大學(xué) 2014

碩士論文
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[2]褐藻膠寡糖的抗炎活性機(jī)制研究[D]. 史旭陽(yáng).深圳大學(xué) 2015
[3]芽孢桿菌褐藻膠裂解酶的實(shí)驗(yàn)室制備及其基因克隆與表達(dá)的研究[D]. 劉玉佩.上海海洋大學(xué) 2011
[4]褐藻膠裂解酶產(chǎn)生菌的篩選、發(fā)酵優(yōu)化及其酶學(xué)特性研究[D]. 侯保兵.浙江工業(yè)大學(xué) 2009
[5]大腸桿菌中重組蛋白可溶性表達(dá)的研究[D]. 蘇裕.華東師范大學(xué) 2007
[6]產(chǎn)褐藻膠裂解酶芽孢桿菌的選育及其產(chǎn)酶性質(zhì)的研究[D]. 張書(shū)利.中國(guó)海洋大學(xué) 2006



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