發(fā)布時間：2022-01-20 13:11

　　白念珠菌（Canidia albicans）是一種條件致病真菌,對于免疫力低下的人群具有嚴重的危害性。由于臨床上抗真菌藥物的濫用,出現(xiàn)了大量具有耐藥性的白念珠菌突變株。白念珠菌中的鈣信號途徑參與調(diào)控細胞的各種代謝反應(yīng),同時也與白念珠菌的菌絲發(fā)育和毒力相關(guān)。通過對白念珠菌鈣信號途徑相關(guān)基因的研究有助于揭示白念珠菌的致病和耐藥性機理,為開發(fā)新的抗真菌藥物提供新的思路。擬南芥（Arabidopsis thaliana）AtCsc1蛋白是一種被高滲壓力激活的鈣離子通透性非選擇性的陽離子通道,在本研究中通過序列比對,發(fā)現(xiàn)了白念珠菌中的五種與At Csc1蛋白同源的蛋白,通過對編碼合成這五種蛋白的基因中的兩個基因CaRSN1和CaCSC1的敲除,構(gòu)建了rsn1/rsn1和csc1/csc1基因缺失株。對rsn1/rsn1和csc1/csc1基因缺失株的表型篩選實驗表明,CaRsn1和CaCsc1蛋白參與白念珠菌細胞內(nèi)的部分離子的穩(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)以及與細胞壁和細胞膜的完整性相關(guān)。白念珠菌的菌絲發(fā)育能力和毒力與它的致病性具有直接的關(guān)系,YPD+10%胎牛血清（Fetal bovine serum,FBS）、... 

【文章來源】：江南大學江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 白念珠菌簡介
    1.2 白念珠菌的二相性與毒力
        1.2.1 白念珠菌的二相性
        1.2.2 白念珠菌的毒力
    1.3 抗真菌藥物與白念珠菌的耐藥性
        1.3.1 抗真菌藥物
        1.3.2 白念珠菌的耐藥性
    1.4 鈣信號途徑
    1.5 類anoctamin超家族簡介
        1.5.1 TMEM16家族
        1.5.2 DUF221家族
        1.5.3 白念珠菌中與AtCsc1同源的蛋白
    1.6 本課題研究的內(nèi)容與意義
第二章 實驗材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗儀器
        2.1.2 實驗試劑與試劑盒
        2.1.3 實驗所用的菌株、質(zhì)粒和引物
        2.1.4 實驗所用的溶液及其配制方法
        2.1.5 實驗所用培養(yǎng)基
    2.2 實驗方法
        2.2.1 菌株的培養(yǎng)與保存
        2.2.2 白念珠菌基因組的提取
        2.2.3 白念珠菌的轉(zhuǎn)化
        2.2.4 大腸桿菌中質(zhì)粒的提取
        2.2.5 PCR擴增DNA片段
        2.2.6 酶切體系的構(gòu)建
        2.2.7 利用同源重組的連接體系的構(gòu)建
        2.2.8 大腸桿菌的轉(zhuǎn)化
        2.2.9 菌絲發(fā)育實驗
        2.2.10 小鼠實驗
        2.2.11 倍比稀釋點板表型篩選實驗
        2.2.12 白念珠菌的熒光定位觀察
第三章 實驗結(jié)果與討論
    3.1 CaRSN1和CaCSC1基因的敲除
        3.1.1 白念珠菌基因的敲除策略
        3.1.2 CaRSN1和CaCSC1基因敲除的結(jié)果
    3.2 白念珠菌csc1/csc1和rsn1/rsn1缺失株表型的篩選
        3.2.1 白念珠菌csc1/csc1缺失株表型的篩選
        3.2.2 白念珠菌rsn1/rsn1缺失株表型的篩選
    3.3 白念珠菌rsn1/rsn1缺失株的菌絲發(fā)育
    3.4 白念珠菌rsn1/rsn1缺失株的毒力研究
        3.4.1 整合CIp 10 質(zhì)粒
        3.4.2 小鼠感染實驗
    3.5 白念珠菌CaRsn1蛋白的亞細胞定位
        3.5.1 表達CaRsn1-GFP融合蛋白的菌株的構(gòu)建及鑒定
        3.5.2 CaRsn1蛋白的亞細胞定位
    3.6 CaRsn1與ScRsn1蛋白的同源性
        3.6.1 CaRsn1互補ScRsn1蛋白的功能的探究
        3.6.2 ScRsn1互補CaRsn1蛋白的功能的探究
主要結(jié)論與展望
    主要結(jié)論
    展望
致謝
參考文獻
附錄：作者在攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文


【參考文獻】：
期刊論文
[1]白念珠菌鈣穩(wěn)態(tài)系統(tǒng)及鈣信號途徑的研究進展[J]. 喻其林,徐寧,李明春.  微生物學報. 2012(04)

博士論文
[1]高滲脅迫門控的鈣通透陽離子通道的分離、鑒定與初步功能分析[D]. 侯聰聰.首都師范大學 2014



本文編號：3598885