目的:在課題組前期研究的基礎(chǔ)上,構(gòu)建穩(wěn)定過表達fancd2os基因的小鼠睪丸間質(zhì)細胞（TM3）模型,分析fancd2os過表達對紫外（UV）誘導(dǎo)TM3細胞凋亡的影響;同時采用RNA干擾策略沉默fancd2os基因觀察UV誘導(dǎo)TM3細胞凋亡的變化;并探討fancd2os促進TM3細胞凋亡的可能機制;借助fancd2os過表達模型及fancd2os沉默分析TM3睪酮分泌的改變;為深入研究該基因在精子發(fā)生中的具體作用提供線索。方法:1.過表達慢病毒載體瞬時感染HEK293T細胞;采用RT-PCR和Western blotting檢測fancd2os在HEK293T細胞中的表達情況;2.建立穩(wěn)定過表達fancd2os的TM3細胞模型;采用RT-PCR和Western blotting檢測fancd2os mRNA和蛋白質(zhì)的穩(wěn)定表達;3.通過間接免疫熒光染色觀察FANCD2OS蛋白在TM3中的定位分布;4.采用UV照射誘導(dǎo)TM3細胞凋亡,利用Western blotting檢測過表達fancd2os后TM3凋亡相關(guān)蛋白Cleaved-Caspase-3、BAX、BCL-2和BCL-XL的變化;5... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級別】：碩士

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前言
第一部分 fancd2os穩(wěn)定過表達TM3模型的構(gòu)建及其對UV誘導(dǎo)TM3細胞凋亡的影響
    1 材料與方法
        1.1 實驗材料
        1.2 實驗方法
    2 結(jié)果
        2.1 fancd2os過表達慢病毒載體轉(zhuǎn)染HEK293T細胞及鑒定
        2.2 fancd2os過表達慢病毒載體穩(wěn)定轉(zhuǎn)染TM3細胞及鑒定
        2.3 細胞免疫熒光染色檢測FANCD2OS蛋白在TM3細胞中的定位
        2.4 Westernblotting檢測UV誘導(dǎo)TM3細胞凋亡蛋白的變化
    3 討論
    4 結(jié)論
第二部分 fancd2os沉默及其對UV誘導(dǎo)TM3細胞凋亡變化的影響
    1 材料與方法
        1.1 實驗材料
        1.2 實驗方法
    2 結(jié)果
        2.1 fancd2os慢病毒干擾載體轉(zhuǎn)染TM3細胞及鑒定
        2.2 Westernblotting檢測細胞凋亡相關(guān)蛋白的變化
        2.3 Westernblotting檢測凋亡抑制劑存在時TM3細胞凋亡的變化
    3 討論
    4 結(jié)論
第三部分 fancd2os對TM3細胞睪酮分泌的影響
    1 材料與方法
        1.1 實驗材料
        1.2 實驗方法
    2 結(jié)果
        2.1 ELISA檢測過表達fancd2os對TM3細胞睪酮分泌的影響
        2.2 ELISA檢測fancd2os沉默對TM3細胞睪酮分泌的影響
        2.3 ELISA檢測fancd2os過表達后加入凋亡抑制劑睪酮的變化
    3 討論
    4 結(jié)論
參考文獻
綜述
    參考文獻
致謝
個人簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
[1]小鼠Fancd2os基因真核表達質(zhì)粒的構(gòu)建及其對人胚腎上皮細胞增殖和凋亡的影響[J]. 李婷,賈三三,溫麗敏,白欣艷,王玉晶,王海龍,解軍,郭睿.  中國生物制品學(xué)雜志. 2016(06)
[2]精子發(fā)生的調(diào)節(jié)機制及其進展[J]. 朱倩,崔毓桂.  生殖醫(yī)學(xué)雜志. 2016(04)



本文編號：3593290