[目的]:E2F轉(zhuǎn)錄因子1（E2F transcription factor 1,E2F1）在人類多種腫瘤中過度表達(dá),我們前期實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)E2F1基因在EBV轉(zhuǎn)化的淋巴母細(xì)胞LCLs中高表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)通過構(gòu)建穩(wěn)定低表達(dá)E2F1基因的Raji細(xì)胞,通過q RT-PCR和Western blot檢測E2F1基因的表達(dá)情況,采用CCK-8實(shí)驗(yàn)、軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)、檢測細(xì)胞周期和遷移侵襲實(shí)驗(yàn)觀察干擾E2F1基因表達(dá)后Raji細(xì)胞的增殖和遷移能力,觀察E2F1基因表達(dá)改變前后EBV陽性淋巴瘤Raji細(xì)胞增殖和遷移能力的影響,為EBV相關(guān)腫瘤的分子機(jī)制研究提供依據(jù)。[方法]:采用q RT-PCR及Western Blot檢測EBV轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞（LCL7）與EBV陽性Raji細(xì)胞中E2F1基因的表達(dá)情況,構(gòu)建針對E2F1基因的慢病毒干擾載體E2F1-sh RNA-GFP-PURO,建立E2F1穩(wěn)定低表達(dá)的Raji細(xì)胞系（Raji/E2F1 sh RNA1、Raji/E2F1 sh RNA2）,通過倒置熒光顯微鏡觀察細(xì)胞內(nèi)綠色熒光情況,采用q RT-PCR和Western Blot驗(yàn)證E2F1基因的干擾... 

【文章來源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

BCA蛋白定量分析圖

干擾靶點(diǎn) siRNA1 序列：CGCTATGAGACCTCACTGAAT干擾靶點(diǎn) siRNA2 序列：CTACTCAGCCTGGAGCAAGAA所選用的干擾載體pHBLV-U6-MCS-CMV-ZsGreen-PGK-PURO載體圖譜（圖2.2）圖 2.2 載體圖譜（2）引物退火形成帶粘性末端的雙鏈片段：其體系如下（20ul）：Component Volume/Concentration10xBuffer 2μlTris-cl PH7.5 100mMNacl 1MEDTA 10mMshDNA-R/shDNA-F 1/1μlH2O 16μl退火步驟如下：Temperature Time95℃ 10min75℃ 10min

第 3 章 結(jié)果測 EBV 陽性淋巴瘤 Raji 細(xì)胞和 EBV 轉(zhuǎn)化 中 E2F1 基因的表達(dá)水平RT-PCR 檢測 E2F1 在 mRNA 水平的表達(dá)情況提取 LCL7 和 Raji 細(xì)胞的總 RNA，首先檢測 RNA 完整脂糖凝膠電泳可見：18S、28S 條帶清楚，無彌散帶且條帶亮度的 2 倍，說明所提 RNA 結(jié)構(gòu)完整，無降解。測得 RNA 的 OD260/280 在 1.8~2.0 之間，說明所提 R續(xù)實(shí)驗(yàn)。將所提 RNA 逆轉(zhuǎn)錄并擴(kuò)增，進(jìn)行 qRT-PCR 檢aji 系的 E2F1 mRNA 表達(dá)高于 LCL7 細(xì)胞，差異具有統(tǒng)05）。（圖 3.1、圖 3.2）

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Prognostic values of the integrated model incorporating the volume of metastatic regional cervical lymph node and pretreatment serum Epstein-Barr virus DNA copy number in predicting distant metastasis in patients with N1 nasopharyngeal carcinoma[J]. Ji-Jin Yao,Guan-Qun Zhou,Ya-Qin Wang,Si-Yang Wang,Wang-Jian Zhang,Ya-Nan Jin,Fan Zhang,Li Li,Li-Zhi Liu,Zhi-Bin Cheng,Jun Ma,Zhen-Yu Qi,Ying Sun.  Chinese Journal of Cancer. 2017(12)
[2]B細(xì)胞淋巴瘤中E2F1、BIRC5、PLK1蛋白表達(dá)及其臨床意義[J]. 賀榮芳,謝黎明,趙強(qiáng),胡義燕,龔邵新,陽帥,張小麗.  臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志. 2012(03)

碩士論文
[1]PLK1表達(dá)下調(diào)誘導(dǎo)Raji細(xì)胞凋亡及其分子機(jī)制的研究[D]. 朱娟.南華大學(xué) 2017
[2]PLK1基因沉默抑制淋巴瘤Raji細(xì)胞增殖和侵襲[D]. 鐘雅婷.南華大學(xué) 2016
[3]EB病毒轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞中相關(guān)基因表達(dá)的檢測與分析[D]. 付婷.南華大學(xué) 2013
[4]EB病毒轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞的差異表達(dá)基因篩選[D]. 戴永明.南華大學(xué) 2011



本文編號：3583876