天麻是一種名貴的中藥材,屬于一種真菌營(yíng)養(yǎng)型蘭科植物,能鎮(zhèn)靜催眠、抗驚厥眩暈、鎮(zhèn)痛、改善記憶、治療老年癡呆,還能夠提高免疫力。天麻主要藥用活性成分為天麻素和對(duì)羥基苯甲醇,藥用天麻兩者總含量不能低于0.25%。天麻中活性成分的合成與細(xì)胞色素P450相關(guān),而細(xì)胞色素P450還原酶（CPR）是細(xì)胞色素P450酶系（CYPs）中重要的組成成分,為CYPs提供電子。蜜環(huán)菌是天麻生長(zhǎng)過(guò)程中最重要的大型共生真菌,侵入到天麻體內(nèi)的蜜環(huán)菌將被天麻消化轉(zhuǎn)化為營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)供給自己生長(zhǎng),蜜環(huán)菌的生長(zhǎng)影響到天麻產(chǎn)量和品質(zhì)。蜜環(huán)菌主要靠降解菌材中的木質(zhì)纖維素為葡萄糖等小分子有機(jī)物供蜜環(huán)菌生長(zhǎng)需要。蜜環(huán)菌利用菌材能力與蜜環(huán)菌分泌漆酶活性有關(guān)。目前,天麻是藥食同源植物,市場(chǎng)需求量大,主要靠人工栽培天麻滿(mǎn)足市場(chǎng)需求。然而,人工栽培天麻功能活性成分含量和利用菌材效率比較低。因此,本研究利用生物工程技術(shù),首先建立蜜環(huán)菌轉(zhuǎn)基因技術(shù),然后通過(guò)蜜環(huán)菌天麻轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,基于轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),篩選天麻細(xì)胞色素P450還原酶基因（GeCPR）和蜜環(huán)菌漆酶基因（Lac）,找出他們CDS序列,通過(guò)RACE-PCR技術(shù)擴(kuò)增出這些基因全長(zhǎng)序列,構(gòu)建Lac基... 

【文章來(lái)源】：昆明理工大學(xué)云南省

【文章頁(yè)數(shù)】：104 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

真核表達(dá)載體pHGWL7-mRFP1的構(gòu)建流程

昆明理工大學(xué)碩士學(xué)位論文20門(mén)載體pENTR-2B分別使用BamH1和Xho1進(jìn)行雙酶切，通過(guò)熱激轉(zhuǎn)化法進(jìn)行連接。提取pENTR-MRFP1質(zhì)粒，與植物表達(dá)載體pHGWL7通過(guò)Gateway技術(shù)進(jìn)行連接，獲得植物表達(dá)載體pHGWL7-mRFP1。然后以pHGWL7-mRFP1的質(zhì)粒為模板進(jìn)行PCR反應(yīng)，獲得一條750bp左右的條帶（圖2.2），再用BamH1和Xho1雙酶切該質(zhì)粒，能獲得750bp左右的條帶（圖2.3），說(shuō)明真核表達(dá)載體pHGWL7-mRFP1構(gòu)建成功。圖2.2PCR檢測(cè)mRFP1基因Figure2.1PCRdetectionofmRFP1gene圖2.3pHGWL7-mRFP1重組質(zhì)粒BamHI和XhoI雙酶切Figure2.3DoubledigestionofBamHIandXhoIbyrecombinantplasmidpHGWL7-mRFP1M：DL5000DNAMarker；1：pMD18-mRFP1重組質(zhì)粒；2：pENTR-mRFP1重組質(zhì)粒；3-4:pHGWL7-mRFP1重組質(zhì)粒BamHI和XhoI雙酶切。750bp

昆明理工大學(xué)碩士學(xué)位論文20門(mén)載體pENTR-2B分別使用BamH1和Xho1進(jìn)行雙酶切，通過(guò)熱激轉(zhuǎn)化法進(jìn)行連接。提取pENTR-MRFP1質(zhì)粒，與植物表達(dá)載體pHGWL7通過(guò)Gateway技術(shù)進(jìn)行連接，獲得植物表達(dá)載體pHGWL7-mRFP1。然后以pHGWL7-mRFP1的質(zhì)粒為模板進(jìn)行PCR反應(yīng)，獲得一條750bp左右的條帶（圖2.2），再用BamH1和Xho1雙酶切該質(zhì)粒，能獲得750bp左右的條帶（圖2.3），說(shuō)明真核表達(dá)載體pHGWL7-mRFP1構(gòu)建成功。圖2.2PCR檢測(cè)mRFP1基因Figure2.1PCRdetectionofmRFP1gene圖2.3pHGWL7-mRFP1重組質(zhì)粒BamHI和XhoI雙酶切Figure2.3DoubledigestionofBamHIandXhoIbyrecombinantplasmidpHGWL7-mRFP1M：DL5000DNAMarker；1：pMD18-mRFP1重組質(zhì)粒；2：pENTR-mRFP1重組質(zhì)粒；3-4:pHGWL7-mRFP1重組質(zhì)粒BamHI和XhoI雙酶切。750bp

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]中國(guó)蜜環(huán)菌的遺傳學(xué)與系統(tǒng)學(xué)研究[D]. 秦國(guó)夫.中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院 2002

碩士論文
[1]天麻林下仿野生種植部分關(guān)鍵技術(shù)的研究[D]. 李振斌.成都中醫(yī)藥大學(xué) 2016
[2]固定化漆酶用于廢水深度處理的研究[D]. 劉影.齊魯工業(yè)大學(xué) 2015



本文編號(hào)：3573279