蒲公英甾醇具有抗乳腺炎及抑制血管炎癥的作用,由于其在蒲公英中含量低,如何提高蒲公英中蒲公英甾醇含量具有重要意義。本試驗(yàn)以丹東蒲公英（Taraxacum antungense Kitag.）為試材,研究茉莉酸甲酯（MeJA）對丹東蒲公英總?cè)坪考吧锖铣赏緩疥P(guān)鍵酶基因表達(dá)量影響。同時,克隆丹東蒲公英甾醇生物合成第一個關(guān)鍵酶鯊烯合酶（TaSS）基因,獲得了TaSS基因過表達(dá)株系,確定TaSS基因在蒲公英甾醇生物合成中的功能�？寺aSS基因啟動子片段并分析該基因啟動子順式作用元件。本試驗(yàn)克隆了茉莉酸信號途徑核心轉(zhuǎn)錄因子TaMYC2并篩選出TaMYC2基因過表達(dá)的毛狀根系,初步分析TaMYC2在蒲公英甾醇生物合成途徑中的功能。主要結(jié)果如下:1.分析生物合成途徑關(guān)鍵基因在茉莉酸甲酯誘導(dǎo)下的表達(dá)模式,結(jié)果表明TaFPS1、TaFPS2、TaHMGR3、TaMYC2、TaMVD、TaHDR和TaSS在處理前期表達(dá)量上調(diào),后期表達(dá)量受抑制。處理期間總?cè)坪烤哂趯φ?并且在處理3 h達(dá)到最高值,表明茉莉酸甲酯可以提高相關(guān)基因表達(dá)量來促進(jìn)蒲公英總?cè)苹衔锖糠e累。2.根據(jù)丹東蒲公英轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),克... 

【文章來源】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

蒲公英甾醇結(jié)構(gòu)

結(jié)果與分析S 基因克隆與表達(dá)載體鑒定實(shí)驗(yàn)室前期測序的丹東蒲公英轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)，利用 Primer 5.反轉(zhuǎn)錄的丹東蒲公英葉片 cDNA 為模板，擴(kuò)增 TaSS 目的片T 克隆載體，轉(zhuǎn)化大腸桿菌，送公司測序。測序結(jié)果顯示，出 1269bp 的片段，包含一個開放閱讀框（ORF）大小為 1中 TaSS 基因相似度為 99%，說明成功克隆出 TaSS 基因。位點(diǎn)，選擇 BamH I 和 Sac I 分別為上下游酶切位點(diǎn)，對目行酶切，純化，連接，測序。測序結(jié)果顯示，成功構(gòu)建 pR。利用凍融法將 pRI101-SS 轉(zhuǎn)化根癌農(nóng)桿菌 GV3103。B

沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文Eleutherococcus senticosus），大豆（Glycine max），柿（Diospyros kaki）和 蒺苜蓿（Medicago truncatula）鯊烯合酶氨基酸序列的同源性 98.56%， 92.81%，.73%， 87.28%， 81.45%， 82.20%， 81.20%， 81.31%， 80.98%和 80.10%。SS 不論是核苷酸序列還是氨基酸序列都與其他植物鯊烯合酶同源性極高，說鯊烯合酶在不同植物中是非常保守的。選擇 NCBI 上已經(jīng)公布的鯊烯合酶序列選擇 11 個植物鯊烯合酶序列構(gòu)建系進(jìn)化樹分別是：橡膠草（AXU93510.1），雪蓮（APG29293.1），青蒿（AAR20329.1），甘菊（AIX97193.1），大豆（NP_001236365.2），煙草（AWK49044.1），茶樹XP_028059258.1），黃辣椒（PHU10676.1），人參（ACV88718.1），黃芪ALA23415.1），擬南芥（AAD00296.1）。發(fā)現(xiàn) TaSS 與菊科植物雪蓮，青蒿，甘菊同源性較高，與橡膠草屬于同一分枝，結(jié)果見圖 8。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[4]茉莉酸甲酯對顛茄主要生物堿含量的影響及其機(jī)理[D]. 張翠平.西南大學(xué) 2017
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本文編號：3567488