[目的]本文旨在通過對黃瓜有限生長調控基因CsCML25啟動子功能的研究,揭示該基因在黃瓜有限生長過程中的轉錄調控機制。[方法]以黃瓜自交系材料CCMC的葉片DNA為模板,克隆CsCML25上游的全長啟動子序列,并對其順式調控元件進行分析;構建CsCML25基因過表達載體以及CsCML25啟動子驅動GFP報告基因的表達載體,通過農桿菌介導遺傳轉化法將其轉化擬南芥后,觀察過表達植株表型并利用熒光顯微鏡觀察GFP的表達規(guī)律;采用RT-qPCR分析該CsCML25啟動子驅動的GFP報告基因在IAA和6-BA處理后以及在調控擬南芥有限生長基因TFL1影響下的表達變化。[結果]CsCML25啟動子全長2 979 bp,包括4個MYB轉錄因子結合位點、1個WUS結合位點以及多個細胞分裂素、生長素和光響應元件。過量表達CsCML25基因能夠造成擬南芥頂端花融合現(xiàn)象,形成與擬南芥突變體tfl1-13相似的有限生長表型。CsCML25啟動子驅動GFP在莖尖分生組織、葉原基、花原基以及花瓣等組織部位表達。RT-qPCR結果表明:IAA和6-BA處理能夠顯著影響CsCML25啟動子的轉錄激活功能;擬南芥有限... 

【文章來源】：南京農業(yè)大學學報. 2020,43(04)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

CsCML25啟動子在黃瓜基因組上的位置

CsCML25啟動子克隆

先將構建的PCsCML25-GFP重組質粒轉化農桿菌GV3101中,再將含35S-CsCML25和PCsCML25-GFP的質粒分別轉入野生型擬南芥(Col)并收獲T0代種子,卡那霉素(50 mg·L-1)篩選后,獲得PCsCML25-GFP轉基因抗性植株5株及pLP-35S-CsCML25轉基因抗性植株2株。提取各單株擬南芥基因組DNA,分別擴增出基因啟動子內部特異性條帶以及基因表達載體的特異性條帶(圖3)。采集陽性苗和未轉化擬南芥的莖尖進行GUS組織化學染色,結果顯示(圖4)陰性對照組無任何藍色斑點出現(xiàn),過表達轉化CsCML25和PCsCML25-GFP的陽性轉基因植株均在莖尖檢測到了GUS基因的表達,表明CsCML25基因及其啟動子已轉入野生型擬南芥。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]黃瓜microRNA171的克隆與功能分析[J]. 朱早兵,虞夏清,翟于菲,王盼喬,趙勤政,李季,婁群峰,陳勁楓.  園藝學報. 2019(05)
[2]過表達鈣調素類似蛋白基因CML25-like誘導黃瓜單性結實的研究[J]. 劉嘉斐,張璐,孟永嬌,段莉莉,羅雨薇,李季,陳勁楓.  南京農業(yè)大學學報. 2019(03)
[3]利用永久群體在不同環(huán)境下定位黃瓜株高QTL[J]. 苗晗,顧興芳,張圣平,張忠華,黃三文,王燁.  中國農業(yè)科學. 2012(22)
[4]水稻干旱誘導型啟動子Oshox24P的分離與鑒定[J]. 楊梅,熊立仲.  華中農業(yè)大學學報. 2011(05)
[5]黃瓜冬季栽培花打頂現(xiàn)象分析及防治措施[J]. 孫小鐳.  山東農業(yè)科學. 1997(01)

博士論文
[1]黃瓜“花打頂”形態(tài)、解剖、細胞學特征及相關基因的分離與鑒定[D]. 李志英.山東農業(yè)大學 2003

碩士論文
[1]日光溫室黃瓜“花打頂”形成機理的研究[D]. 鄭昭英.山東農業(yè)大學 2003



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