[目的]本文旨在通過對黃瓜有限生長調(diào)控基因CsCML25啟動子功能的研究,揭示該基因在黃瓜有限生長過程中的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制。[方法]以黃瓜自交系材料CCMC的葉片DNA為模板,克隆CsCML25上游的全長啟動子序列,并對其順式調(diào)控元件進(jìn)行分析;構(gòu)建CsCML25基因過表達(dá)載體以及CsCML25啟動子驅(qū)動GFP報告基因的表達(dá)載體,通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化法將其轉(zhuǎn)化擬南芥后,觀察過表達(dá)植株表型并利用熒光顯微鏡觀察GFP的表達(dá)規(guī)律;采用RT-qPCR分析該CsCML25啟動子驅(qū)動的GFP報告基因在IAA和6-BA處理后以及在調(diào)控擬南芥有限生長基因TFL1影響下的表達(dá)變化。[結(jié)果]CsCML25啟動子全長2 979 bp,包括4個MYB轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點、1個WUS結(jié)合位點以及多個細(xì)胞分裂素、生長素和光響應(yīng)元件。過量表達(dá)CsCML25基因能夠造成擬南芥頂端花融合現(xiàn)象,形成與擬南芥突變體tfl1-13相似的有限生長表型。CsCML25啟動子驅(qū)動GFP在莖尖分生組織、葉原基、花原基以及花瓣等組織部位表達(dá)。RT-qPCR結(jié)果表明:IAA和6-BA處理能夠顯著影響CsCML25啟動子的轉(zhuǎn)錄激活功能;擬南芥有限... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2020,43(04)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

CsCML25啟動子在黃瓜基因組上的位置

CsCML25啟動子克隆

先將構(gòu)建的PCsCML25-GFP重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌GV3101中,再將含35S-CsCML25和PCsCML25-GFP的質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)入野生型擬南芥(Col)并收獲T0代種子,卡那霉素(50 mg·L-1)篩選后,獲得PCsCML25-GFP轉(zhuǎn)基因抗性植株5株及pLP-35S-CsCML25轉(zhuǎn)基因抗性植株2株。提取各單株擬南芥基因組DNA,分別擴(kuò)增出基因啟動子內(nèi)部特異性條帶以及基因表達(dá)載體的特異性條帶(圖3)。采集陽性苗和未轉(zhuǎn)化擬南芥的莖尖進(jìn)行GUS組織化學(xué)染色,結(jié)果顯示(圖4)陰性對照組無任何藍(lán)色斑點出現(xiàn),過表達(dá)轉(zhuǎn)化CsCML25和PCsCML25-GFP的陽性轉(zhuǎn)基因植株均在莖尖檢測到了GUS基因的表達(dá),表明CsCML25基因及其啟動子已轉(zhuǎn)入野生型擬南芥。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]黃瓜“花打頂”形態(tài)、解剖、細(xì)胞學(xué)特征及相關(guān)基因的分離與鑒定[D]. 李志英.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2003

碩士論文
[1]日光溫室黃瓜“花打頂”形成機(jī)理的研究[D]. 鄭昭英.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2003



本文編號：3556978