橡膠草橡膠生物合成中SRPP基因的初步探究
發(fā)布時(shí)間:2021-12-10 09:41
橡膠草具有適應(yīng)性強(qiáng)、種植密集、生長(zhǎng)期短、采收自動(dòng)化和產(chǎn)膠優(yōu)質(zhì)等優(yōu)點(diǎn),是一種具有極高開(kāi)發(fā)價(jià)值的經(jīng)濟(jì)作物。本論文提取并測(cè)定了橡膠草根部最主要的三種生物產(chǎn)品的含量(w/w%)。橡膠的含量為5.78%~8.1%,菊粉的含量為18.2%~21.5%,蛋白質(zhì)的含量為7.45%~9.54%。這為橡膠草的選種提供了參考。另外,橡膠草是研究植物橡膠合成機(jī)理的理想模型植物,具有很高的科學(xué)意義和應(yīng)用價(jià)值。本論文利用qRT-PCR技術(shù)先是篩選出了一個(gè)可應(yīng)用于橡膠草體系的內(nèi)參基因,即β-actin,然后在不同樣品中分析了SRPP基因家族與橡膠含量的關(guān)系。結(jié)果表明,SRPP6可能與橡膠草橡膠的合成與調(diào)控作用無(wú)關(guān);SRPP1和SRPP2可能直接參與橡膠的合成與調(diào)控。SRPP3可能在參與橡膠合成的同時(shí)還存在其他生理作用。CRISPR/Cas9系統(tǒng)成本低廉且簡(jiǎn)便易行,被廣泛應(yīng)用于對(duì)植物的基因編輯,本論文首先構(gòu)建并檢測(cè)了作用于橡膠草的CRISPR/Cas9雙元載體。用轉(zhuǎn)化有雙元載體的農(nóng)桿菌浸染橡膠草根的細(xì)根,突變體的存活率為26.7%~33.3%。Sanger測(cè)序結(jié)果可知srRNA-1植株沒(méi)有突變,srRNA-2突變體植...
【文章來(lái)源】:北京化工大學(xué)北京市 211工程院校 教育部直屬院校
【文章頁(yè)數(shù)】:76 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【部分圖文】:
圖1-1橡膠草橡膠的生物合成途徑(基于Tao?Lin等人的研宄做了修改)??Fig.1-1?Rubber?biosynthesis?pathway?of?TKS.(This?map?was?draw?based?on?
用。巴西橡膠樹(shù)膠乳是天然橡膠的主要??來(lái)源,橡膠延伸因子(及研)和IP作為膠乳中的兩大主要蛋白,被認(rèn)為參與??了橡膠的合成和調(diào)控。橡膠草和橡膠樹(shù)、銀膠菊、一樣都有狀尸戶之類的蛋白質(zhì),??它們都產(chǎn)生高分子量橡膠。Wititsuwannakul等人認(rèn)為在乳膠凝固中起作??用,乳膠凝固是密封傷口部位以防止真菌或細(xì)菌病原體感染的過(guò)程,進(jìn)一步表明??參與橡膠生物合成或調(diào)節(jié)?傊,這些結(jié)果將與較高分子量橡膠的存在相??關(guān)聯(lián)。??■M??C?A?D??200?nm?9?100?nm??圖1-2巴西橡膠樹(shù)中橡膠顆粒和狀PP的微形態(tài)特征[8]。(A)橡膠顆粒的SEM觀察;(B)??經(jīng)洗滌五次后洗滌的橡膠顆粒的TEM觀察;(C)用抗?fàn)羁贵w和金綴合的二抗標(biāo)記的大??橡膠顆粒(LRP)的TEM觀察;(D)用抗抗體和金綴合的二抗標(biāo)記的小橡膠顆粒(SRP)??的TEM觀察??Fig.?1-2?Micromorphological?characterization?of?rubber?particles?and?SRPP?in?H.?brasiliensis.??(A)?SEM?observation?of?rubber?particles.?(B)?TEM?observation?of?washed?rubber?particles?after??being?washed?five?times.?There?were?no?gold?particles?attached.?(C)?TEM?observation?of?large??rubber?particles?(LRPs),?labeled?with?anti-SRPP?antibody?a
111?|?|?i??y^\\?\?'?"?jjj?'?N>.?,??3?nnhnnnnnnnnn?nN?Cas9?^?Ncc?nnnnnnnnnnnn?5??I?II?I?I?I?審?I?■?t?I?i?I?II?t?I?I?I?酒?I?f?I?I??一?NNNNNNNNNNNNN,,?Jj)?r.g?N?N?N?N?NJI?N?N?N?N??s??.....?1?g?-?!?.?.?J&St-?Chromosome??Target?wt?J20nt)??圖1-3?CRISPR/Ca9系統(tǒng)的敲除機(jī)制的圖解概述[11]。綠色和黑色線分別代表RNA和基因組??DNA分子的骨架;紅色箭頭表示切割位點(diǎn);Cas9,?Cas9蛋白;crRNA,CRISPRRNA;?PAM,??原型間隔相鄰圖案;sgRNA,單指導(dǎo)RNA;?tracrRNA,反式編碼的CR1SPRRNA??Fig.?1-3?Diagrammatic?overview?of?the?CRISPR-Cas?mediated?cleavage?mechanism.?Green?and??black?lines?represent?the?backbone?of?the?RNA?and?genomic?DNA?molecule,?respectively.?Red??arrow?indicates?the?cleavage?sites.?Cas9,?(CRISPR)-associated?protein?9;?crRNA,?CRISPR?RNA;??PAM,?protospacer?adjacent?motifs;?sgRNA,?Single?guide?RN
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]全基因組關(guān)聯(lián)分析在油菜遺傳育種中的應(yīng)用和研究進(jìn)展[J]. 劉紅占,王俊生,胡利宗,王雪芹,李超瓊,喬琳,李俐俐,殷貴鴻,李菁菁. 分子植物育種. 2018(08)
[2]利用geNorm、NormFinder和BestKeeper軟件進(jìn)行內(nèi)參基因穩(wěn)定性分析的方法[J]. 吳建陽(yáng),何冰,杜玉潔,李偉才,魏永贊. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技. 2017(05)
[3]橡膠草實(shí)時(shí)熒光定量PCR內(nèi)參基因評(píng)價(jià)[J]. 覃碧,潘敏,余海洋,楊玉雙,甘霖,劉實(shí)忠. 植物生理學(xué)報(bào). 2016(07)
[4]應(yīng)用CRISPR/Cas9技術(shù)在楊樹(shù)中高效敲除多個(gè)靶基因[J]. 劉婷婷,范迪,冉玲玉,姜淵忠,劉瑞,羅克明. 遺傳. 2015(10)
[5]CRISPR/Cas9基因組編輯技術(shù)在植物基因功能研究及植物改良中的應(yīng)用[J]. 曾秀英,侯學(xué)文. 植物生理學(xué)報(bào). 2015(09)
[6]CRISPR/Cas9系統(tǒng)中sgRNA設(shè)計(jì)與脫靶效應(yīng)評(píng)估[J]. 謝勝松,張懿,張利生,李廣磊,趙長(zhǎng)志,倪攀,趙書紅. 遺傳. 2015(11)
[7]CRISPR/Cas9系統(tǒng)——靶向基因組編輯的新策略[J]. 趙海衛(wèi),呂欣,尹文. 中國(guó)病原生物學(xué)雜志. 2015(03)
[8]焦磷酸測(cè)序法與Sanger測(cè)序法檢測(cè)CYP2C19*17基因多態(tài)性方法學(xué)對(duì)比研究[J]. 王謙,杜亞梅,張國(guó)軍,康熙雄. 中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù). 2014(03)
[9]全基因組關(guān)聯(lián)分析在植物中的應(yīng)用[J]. 涂雨辰,田云,盧向陽(yáng). 化學(xué)與生物工程. 2013(06)
[10]Trizol試劑法快速高效提取3種作物不同組織總RNA[J]. 吳凱朝,黃誠(chéng)梅,李楊瑞,楊麗濤,吳建明. 南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2012(12)
博士論文
[1]菊粉的分離純化過(guò)程和功能性產(chǎn)品研究[D]. 魏凌云.浙江大學(xué) 2006
碩士論文
[1]蒲公英橡膠草橡膠定量分析、橡膠提取及結(jié)構(gòu)與性能表征[D]. 劉源博.北京化工大學(xué) 2016
[2]橡膠草再生體系的建立及遺傳轉(zhuǎn)化的研究[D]. 羅成華.石河子大學(xué) 2013
[3]菊粉物化特性的研究[D]. 許威.河南科技大學(xué) 2012
本文編號(hào):3532363
【文章來(lái)源】:北京化工大學(xué)北京市 211工程院校 教育部直屬院校
【文章頁(yè)數(shù)】:76 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【部分圖文】:
圖1-1橡膠草橡膠的生物合成途徑(基于Tao?Lin等人的研宄做了修改)??Fig.1-1?Rubber?biosynthesis?pathway?of?TKS.(This?map?was?draw?based?on?
用。巴西橡膠樹(shù)膠乳是天然橡膠的主要??來(lái)源,橡膠延伸因子(及研)和IP作為膠乳中的兩大主要蛋白,被認(rèn)為參與??了橡膠的合成和調(diào)控。橡膠草和橡膠樹(shù)、銀膠菊、一樣都有狀尸戶之類的蛋白質(zhì),??它們都產(chǎn)生高分子量橡膠。Wititsuwannakul等人認(rèn)為在乳膠凝固中起作??用,乳膠凝固是密封傷口部位以防止真菌或細(xì)菌病原體感染的過(guò)程,進(jìn)一步表明??參與橡膠生物合成或調(diào)節(jié)?傊,這些結(jié)果將與較高分子量橡膠的存在相??關(guān)聯(lián)。??■M??C?A?D??200?nm?9?100?nm??圖1-2巴西橡膠樹(shù)中橡膠顆粒和狀PP的微形態(tài)特征[8]。(A)橡膠顆粒的SEM觀察;(B)??經(jīng)洗滌五次后洗滌的橡膠顆粒的TEM觀察;(C)用抗?fàn)羁贵w和金綴合的二抗標(biāo)記的大??橡膠顆粒(LRP)的TEM觀察;(D)用抗抗體和金綴合的二抗標(biāo)記的小橡膠顆粒(SRP)??的TEM觀察??Fig.?1-2?Micromorphological?characterization?of?rubber?particles?and?SRPP?in?H.?brasiliensis.??(A)?SEM?observation?of?rubber?particles.?(B)?TEM?observation?of?washed?rubber?particles?after??being?washed?five?times.?There?were?no?gold?particles?attached.?(C)?TEM?observation?of?large??rubber?particles?(LRPs),?labeled?with?anti-SRPP?antibody?a
111?|?|?i??y^\\?\?'?"?jjj?'?N>.?,??3?nnhnnnnnnnnn?nN?Cas9?^?Ncc?nnnnnnnnnnnn?5??I?II?I?I?I?審?I?■?t?I?i?I?II?t?I?I?I?酒?I?f?I?I??一?NNNNNNNNNNNNN,,?Jj)?r.g?N?N?N?N?NJI?N?N?N?N??s??.....?1?g?-?!?.?.?J&St-?Chromosome??Target?wt?J20nt)??圖1-3?CRISPR/Ca9系統(tǒng)的敲除機(jī)制的圖解概述[11]。綠色和黑色線分別代表RNA和基因組??DNA分子的骨架;紅色箭頭表示切割位點(diǎn);Cas9,?Cas9蛋白;crRNA,CRISPRRNA;?PAM,??原型間隔相鄰圖案;sgRNA,單指導(dǎo)RNA;?tracrRNA,反式編碼的CR1SPRRNA??Fig.?1-3?Diagrammatic?overview?of?the?CRISPR-Cas?mediated?cleavage?mechanism.?Green?and??black?lines?represent?the?backbone?of?the?RNA?and?genomic?DNA?molecule,?respectively.?Red??arrow?indicates?the?cleavage?sites.?Cas9,?(CRISPR)-associated?protein?9;?crRNA,?CRISPR?RNA;??PAM,?protospacer?adjacent?motifs;?sgRNA,?Single?guide?RN
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]全基因組關(guān)聯(lián)分析在油菜遺傳育種中的應(yīng)用和研究進(jìn)展[J]. 劉紅占,王俊生,胡利宗,王雪芹,李超瓊,喬琳,李俐俐,殷貴鴻,李菁菁. 分子植物育種. 2018(08)
[2]利用geNorm、NormFinder和BestKeeper軟件進(jìn)行內(nèi)參基因穩(wěn)定性分析的方法[J]. 吳建陽(yáng),何冰,杜玉潔,李偉才,魏永贊. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技. 2017(05)
[3]橡膠草實(shí)時(shí)熒光定量PCR內(nèi)參基因評(píng)價(jià)[J]. 覃碧,潘敏,余海洋,楊玉雙,甘霖,劉實(shí)忠. 植物生理學(xué)報(bào). 2016(07)
[4]應(yīng)用CRISPR/Cas9技術(shù)在楊樹(shù)中高效敲除多個(gè)靶基因[J]. 劉婷婷,范迪,冉玲玉,姜淵忠,劉瑞,羅克明. 遺傳. 2015(10)
[5]CRISPR/Cas9基因組編輯技術(shù)在植物基因功能研究及植物改良中的應(yīng)用[J]. 曾秀英,侯學(xué)文. 植物生理學(xué)報(bào). 2015(09)
[6]CRISPR/Cas9系統(tǒng)中sgRNA設(shè)計(jì)與脫靶效應(yīng)評(píng)估[J]. 謝勝松,張懿,張利生,李廣磊,趙長(zhǎng)志,倪攀,趙書紅. 遺傳. 2015(11)
[7]CRISPR/Cas9系統(tǒng)——靶向基因組編輯的新策略[J]. 趙海衛(wèi),呂欣,尹文. 中國(guó)病原生物學(xué)雜志. 2015(03)
[8]焦磷酸測(cè)序法與Sanger測(cè)序法檢測(cè)CYP2C19*17基因多態(tài)性方法學(xué)對(duì)比研究[J]. 王謙,杜亞梅,張國(guó)軍,康熙雄. 中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù). 2014(03)
[9]全基因組關(guān)聯(lián)分析在植物中的應(yīng)用[J]. 涂雨辰,田云,盧向陽(yáng). 化學(xué)與生物工程. 2013(06)
[10]Trizol試劑法快速高效提取3種作物不同組織總RNA[J]. 吳凱朝,黃誠(chéng)梅,李楊瑞,楊麗濤,吳建明. 南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2012(12)
博士論文
[1]菊粉的分離純化過(guò)程和功能性產(chǎn)品研究[D]. 魏凌云.浙江大學(xué) 2006
碩士論文
[1]蒲公英橡膠草橡膠定量分析、橡膠提取及結(jié)構(gòu)與性能表征[D]. 劉源博.北京化工大學(xué) 2016
[2]橡膠草再生體系的建立及遺傳轉(zhuǎn)化的研究[D]. 羅成華.石河子大學(xué) 2013
[3]菊粉物化特性的研究[D]. 許威.河南科技大學(xué) 2012
本文編號(hào):3532363
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