目的:利用由295個靶基因所組成的高通量測序Panel,試建立適用于包括表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor,EGFR）、間變淋巴瘤激酶（anaplastic lymphoma kinase,ALK）、酪氨酸激酶受體（tyrosine kinase receptor,KIT）及大鼠肉瘤病毒癌基因（Kirsten rat sarcoma viral oncogene,KRAS）體細(xì)胞突變高通量測序法日常檢測的室內(nèi)質(zhì)量控制體系。方法:選擇EGFR、ALK、KIT和KRAS 4種基因7個突變類型的患者樣本,按比例稀釋成5.00%、2.50%突變頻率的樣本作為外部質(zhì)控品,對其均一性、穩(wěn)定性及特異性進行評價。結(jié)果:均一性評價結(jié)果顯示質(zhì)控品均一性良好,穩(wěn)定性評價結(jié)果表明質(zhì)控品檢測結(jié)果隨時間延長無明顯趨勢變化,且經(jīng)變異分析均顯示變異系數(shù)<10%。結(jié)論:臨床檢測突變樣本型模式的陽性混合標(biāo)本制備定量檢測的5.00%和2.50%的兩個質(zhì)控品均一性、穩(wěn)定性及特異性良好,可有效用于基于探針捕獲的包括EGFR、ALK、KIT及KRAS基因Panel體細(xì)胞突變高... 

【文章來源】：腫瘤預(yù)防與治療. 2020,33(10)

【文章頁數(shù)】：9 頁

【部分圖文】：

基于捕獲高通量測序技術(shù)檢測流程

質(zhì)控品在不同溫度下的短期穩(wěn)定性驗證，分別在第0、1、2、3、4周取同樣的檢測量200 ng進行檢測，評價結(jié)果見圖5;質(zhì)控品在-20℃長期穩(wěn)定性驗證，分別在第0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12月取同樣的檢測量200 ng進行檢測，評價結(jié)果見圖6。5.00%、2.50%突變率質(zhì)控品在不同溫度下檢測結(jié)果無明顯變化，且經(jīng)變異分析均顯示CV<10%，表明質(zhì)控品隨保存時間延長不存在趨勢變化。因此，質(zhì)控品5.00%和質(zhì)控品2.50%在4℃和25℃條件下短期保存1個月是穩(wěn)定的，在-20℃長期保存12個月也是穩(wěn)定的。將5.00%、2.50%陽性質(zhì)控品分別進行3 000×、2 000×、900×、700×、500×、400×、350×及200×不同深度的高通量測序，每個深度分別取3次，結(jié)果顯示500×以上，質(zhì)控品的突變率不會隨著測序深度出現(xiàn)明顯的變異，均能測出低突變標(biāo)本，說明質(zhì)控品穩(wěn)定性較好(圖7、8)。根據(jù)連續(xù)20次日常質(zhì)控品檢測結(jié)果繪制的Levey-Jennings質(zhì)控圖顯示，5.00%、2.50%質(zhì)控品分別計算出均值(x)為5.11%和2.68%，標(biāo)準(zhǔn)差(s)為0.13%和0.10%,CV為2.61%和3.99%，可根據(jù)其質(zhì)控趨勢判斷質(zhì)控品比較穩(wěn)定(圖9、10)。圖3 5.00%質(zhì)控品的室內(nèi)質(zhì)控日內(nèi)重復(fù)性分析(N=10)

5.00%質(zhì)控品的室內(nèi)質(zhì)控日內(nèi)重復(fù)性分析(N=10)

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號：3528065