目的:利用由295個(gè)靶基因所組成的高通量測(cè)序Panel,試建立適用于包括表皮生長(zhǎng)因子受體（epidermal growth factor receptor,EGFR）、間變淋巴瘤激酶（anaplastic lymphoma kinase,ALK）、酪氨酸激酶受體（tyrosine kinase receptor,KIT）及大鼠肉瘤病毒癌基因（Kirsten rat sarcoma viral oncogene,KRAS）體細(xì)胞突變高通量測(cè)序法日常檢測(cè)的室內(nèi)質(zhì)量控制體系。方法:選擇EGFR、ALK、KIT和KRAS 4種基因7個(gè)突變類型的患者樣本,按比例稀釋成5.00%、2.50%突變頻率的樣本作為外部質(zhì)控品,對(duì)其均一性、穩(wěn)定性及特異性進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果:均一性評(píng)價(jià)結(jié)果顯示質(zhì)控品均一性良好,穩(wěn)定性評(píng)價(jià)結(jié)果表明質(zhì)控品檢測(cè)結(jié)果隨時(shí)間延長(zhǎng)無(wú)明顯趨勢(shì)變化,且經(jīng)變異分析均顯示變異系數(shù)<10%。結(jié)論:臨床檢測(cè)突變樣本型模式的陽(yáng)性混合標(biāo)本制備定量檢測(cè)的5.00%和2.50%的兩個(gè)質(zhì)控品均一性、穩(wěn)定性及特異性良好,可有效用于基于探針捕獲的包括EGFR、ALK、KIT及KRAS基因Panel體細(xì)胞突變高... 

【文章來(lái)源】：腫瘤預(yù)防與治療. 2020,33(10)

【文章頁(yè)數(shù)】：9 頁(yè)

【部分圖文】：

基于捕獲高通量測(cè)序技術(shù)檢測(cè)流程

質(zhì)控品在不同溫度下的短期穩(wěn)定性驗(yàn)證，分別在第0、1、2、3、4周取同樣的檢測(cè)量200 ng進(jìn)行檢測(cè)，評(píng)價(jià)結(jié)果見(jiàn)圖5;質(zhì)控品在-20℃長(zhǎng)期穩(wěn)定性驗(yàn)證，分別在第0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12月取同樣的檢測(cè)量200 ng進(jìn)行檢測(cè)，評(píng)價(jià)結(jié)果見(jiàn)圖6。5.00%、2.50%突變率質(zhì)控品在不同溫度下檢測(cè)結(jié)果無(wú)明顯變化，且經(jīng)變異分析均顯示CV<10%，表明質(zhì)控品隨保存時(shí)間延長(zhǎng)不存在趨勢(shì)變化。因此，質(zhì)控品5.00%和質(zhì)控品2.50%在4℃和25℃條件下短期保存1個(gè)月是穩(wěn)定的，在-20℃長(zhǎng)期保存12個(gè)月也是穩(wěn)定的。將5.00%、2.50%陽(yáng)性質(zhì)控品分別進(jìn)行3 000×、2 000×、900×、700×、500×、400×、350×及200×不同深度的高通量測(cè)序，每個(gè)深度分別取3次，結(jié)果顯示500×以上，質(zhì)控品的突變率不會(huì)隨著測(cè)序深度出現(xiàn)明顯的變異，均能測(cè)出低突變標(biāo)本，說(shuō)明質(zhì)控品穩(wěn)定性較好(圖7、8)。根據(jù)連續(xù)20次日常質(zhì)控品檢測(cè)結(jié)果繪制的Levey-Jennings質(zhì)控圖顯示，5.00%、2.50%質(zhì)控品分別計(jì)算出均值(x)為5.11%和2.68%，標(biāo)準(zhǔn)差(s)為0.13%和0.10%,CV為2.61%和3.99%，可根據(jù)其質(zhì)控趨勢(shì)判斷質(zhì)控品比較穩(wěn)定(圖9、10)。圖3 5.00%質(zhì)控品的室內(nèi)質(zhì)控日內(nèi)重復(fù)性分析(N=10)

5.00%質(zhì)控品的室內(nèi)質(zhì)控日內(nèi)重復(fù)性分析(N=10)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]二代測(cè)序臨床應(yīng)用的質(zhì)量控制[J]. 肖林林,胡婷婷,魏取好,劉維薇.  臨床檢驗(yàn)雜志. 2019(10)
[2]cfDNA在非小細(xì)胞肺癌中的研究進(jìn)展[J]. 曹軻,陳正庭,常莉,李文輝.  腫瘤預(yù)防與治療. 2019(09)
[3]FFPE組織提取DNA樣本質(zhì)量評(píng)價(jià)的多中心調(diào)研[J]. 楊軍,張標(biāo),馬恒輝,葉慶.  臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志. 2018(06)
[4]二代測(cè)序技術(shù)在肺癌精準(zhǔn)治療時(shí)代的應(yīng)用與思考[J]. 段建春.  中華醫(yī)學(xué)雜志. 2018 (19)
[5]高通量測(cè)序臨床應(yīng)用中數(shù)據(jù)質(zhì)量控制和分析若干問(wèn)題的探討[J]. 喻東,郭瀛軍.  檢驗(yàn)醫(yī)學(xué). 2017(04)
[6]臨床分子病理實(shí)驗(yàn)室二代基因測(cè)序檢測(cè)專家共識(shí)[J]. 葉豐,吳煥文.  中華病理學(xué)雜志. 2017 (03)
[7]下一代測(cè)序（NGS）技術(shù)的發(fā)展及在腫瘤研究的應(yīng)用[J]. 邵向陽(yáng),徐偉文.  分子診斷與治療雜志. 2016(05)
[8]EGFR19基因體細(xì)胞突變焦磷酸測(cè)序法室內(nèi)質(zhì)量控制的建立[J]. 鐘焱,周鋼.  臨床檢驗(yàn)雜志. 2016(03)
[9]淺談ISO15189質(zhì)量管理體系規(guī)范下的醫(yī)院檢驗(yàn)科人員的教育和管理[J]. 馬曉露,李士軍.  國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志. 2016(05)
[10]二代測(cè)序技術(shù)在臨床醫(yī)學(xué)上的相關(guān)應(yīng)用[J]. 周瑩,許冰瑩.  昆明醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2016(03)



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