發(fā)布時間：2021-11-28 10:52

　　目的:1.構(gòu)建一種由survivin啟動子介導的重組載體pc DNA3.1-p Survivin-TK。2.檢測由survivin啟動子調(diào)控的單純皰疹病毒胸苷激酶（HSVtk）自殺基因的真核表達載體pc DNA3.1-p Survivin-TK在肝癌細胞內(nèi)是否能夠特異性表達。3.研究由survivin啟動子介導的HSVtk自殺基因聯(lián)合更昔洛韋（GCV）對肝癌細胞的體外殺傷作用。方法:1.體外培養(yǎng)HL-7702人正常肝細胞、HEK293T人胚腎細胞、Hep G2及Hu H-7人肝癌細胞。2.提取Hep G2細胞的基因組DNA,PCR擴增survivin啟動子序列;構(gòu)建重組載體pc DNA3.1-p Survivin-TK并進行測序,通過BLAST對DNA序列的同源性進行比對;將該質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)導入大腸桿菌DH5α中,通過菌液PCR擴增HSVtk基因,采用瓊脂糖凝膠電泳鑒定擴增產(chǎn)物。3.用重組質(zhì)粒pc DNA3.1-p Survivin-TK分別轉(zhuǎn)染HL-7702、HEK293T、Hep G2及Hu H-7細胞,48小時后提取細胞總RNA及總蛋白,經(jīng)RT-PCR法及Western blot法檢... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學山西省

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
常用縮寫詞中英文對照表
前言
1 實驗材料
    1.1 細胞株
    1.2 菌種
    1.3 質(zhì)粒
    1.4 主要試劑
    1.5 實驗所需引物
    1.6 主要儀器及器材
    1.7 主要試劑的配制方法
2 實驗方法
    2.1 重組質(zhì)粒pcDNA3.1-pSurvivin-TK的構(gòu)建與鑒定
    2.2 細胞培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染
    2.3 RT-PCR法
    2.4 Western blot法
    2.5 MTT法
    2.6 Hoechst染色法
    2.7 Annexin V-PI細胞凋亡檢測法
    2.8 細胞內(nèi)活性氧的熒光探針檢測法
    2.9 Caspase-3 染色法
    2.10 統(tǒng)計學分析
3 實驗結(jié)果
    3.1 細胞培養(yǎng)
    3.2 pcDNA3.1-pSurvivin-TK質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定
    3.3 RT-PCR法檢測HSVtk基因的mRNA表達
    3.4 Western blot法檢測HSVtk基因的蛋白表達
    3.5 MTT法檢測細胞存活率
    3.6 Hoechst染色法檢測細胞凋亡
    3.7 流式細胞儀檢測細胞凋亡率的變化
    3.8 HSVtk/GCV系統(tǒng)對細胞內(nèi)活性氧水平的影響
    3.9 細胞內(nèi)活化caspase-3 水平的變化
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻
綜述
    參考文獻
致謝
在學期間承擔/參與的科研課題與研究成果
個人簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3524288