以毛果楊（Populus trichocarpa）幼嫩葉片為材料,進(jìn)行原生質(zhì)體分離,結(jié)果表明,酶解液（20 mL）的組成為1.5%纖維素酶R10+0.4%離析酶+2 mL 0.2 mol/L MES+10 mL 0.8 mol/L甘露醇+0.2 mL 2 mol/L KCl,所得原生質(zhì)體為2×10⁵個(gè)細(xì)胞/mL。在此基礎(chǔ)上,對(duì)白樺中一個(gè)FLA（fasciclin-like arabinogalactan-protein）基因BpFLA20進(jìn)行了亞細(xì)胞定位研究。系統(tǒng)進(jìn)化分析顯示,BpFLA20蛋白在序列上與次生壁合成相關(guān)的AtFLA11和AtFLA12蛋白相近。以白樺的根、莖、葉cDNA為模版,進(jìn)行了熒光定量PCR實(shí)驗(yàn),結(jié)果表明該基因在根中的表達(dá)量最高,在葉中的表達(dá)量最低。以本研究分離的毛果楊原生質(zhì)體為受體,利用PEG介導(dǎo)的原生質(zhì)體瞬時(shí)轉(zhuǎn)化法將35S::FLA20-GFP融合表達(dá)載體轉(zhuǎn)化到毛果楊原生質(zhì)體中進(jìn)行亞細(xì)胞定位研究,結(jié)果顯示,BpFLA20蛋白定位于細(xì)胞膜。 

【文章來(lái)源】：東北林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2020,48(10)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【部分圖文】：

毛果楊葉片原生質(zhì)體

以白樺cDNA為模板克隆目的片段,并通過(guò)1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè),結(jié)果如圖2所示:目的片段大小為753 bp。經(jīng)測(cè)序比對(duì),結(jié)果顯示測(cè)序結(jié)果與原序列比對(duì)一致性為100%,證明BpFLA20基因克隆成功。BpFLA20基因起始于ATG,終止于TGA,共編碼250個(gè)氨基酸殘基。蛋白質(zhì)分子質(zhì)量為26.3 u。理論等電點(diǎn)為6.04。如圖3所示BpFLA20含有一個(gè)FAS保守結(jié)構(gòu)域長(zhǎng)度為:81aa-187aa。跨膜區(qū)預(yù)測(cè)結(jié)果顯示BpFLA20基因不存在跨膜區(qū)。參照對(duì)擬南芥FLA蛋白分組[33],對(duì)確認(rèn)的BpFLA20基因推導(dǎo)的蛋白序列與21條已知的擬南芥AtFLA基因的蛋白序列進(jìn)行了家族聚類分析,系統(tǒng)進(jìn)化分析結(jié)果顯示BpFLA20與AtFLA11和AtFLA12相近,且BpFLA20與AtFLA7、AtFLA9、AtFLA13、AtFLA6、AtFLA12、AtFLA11為一組。2.3 BpFLA20的組織表達(dá)

以白樺的根、莖、葉cDNA為模版,進(jìn)行了熒光定量PCR試驗(yàn),對(duì)白樺根、莖、葉中BpFLA20基因的表達(dá)量進(jìn)行分析,結(jié)果顯示:BpFLA20在葉中的表達(dá)量最低,在根中的表達(dá)量最高,是葉中表達(dá)量的5.78倍,莖中相對(duì)表達(dá)量為葉中的1.21倍。圖4 BpFLA20跨膜區(qū)預(yù)測(cè)結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
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