發(fā)布時(shí)間：2021-11-25 22:15

　　堿性/中性轉(zhuǎn)化酶也稱胞質(zhì)轉(zhuǎn)化酶（alkaline/neutral invertase,cytoplasmic invertases,CINs）,是植物中存在的專性分解蔗糖的蛋白家族,在調(diào)控植物器官發(fā)育和產(chǎn)品品質(zhì)形成中發(fā)揮重要作用。本研究利用生物信息學(xué)分析、原核表達(dá)、亞細(xì)胞定位、RNA干擾等方法來探究番茄（Solanum lycopersicum）中堿性/中性轉(zhuǎn)化酶SlCIN3基因的功能。主要研究結(jié)果如下:1)通過對番茄果實(shí)成熟時(shí)期的SlCINs基因家族成員的表達(dá)分析發(fā)現(xiàn),番茄中的SlCINs基因在果實(shí)轉(zhuǎn)色期和紅熟期的表達(dá)較高,其中SlCIN3基因的表達(dá)量最高,其在轉(zhuǎn)色期和紅熟期的表達(dá)與綠熟期相比增加了4-5倍,推測其可能是果實(shí)成熟后期己糖積累過程中的功能基因之一。利用NaCl、PEG和ABA對番茄幼苗進(jìn)行處理后,分析SlCIN3基因的表達(dá)模式發(fā)現(xiàn),SlCIN3的表達(dá)受高鹽、滲透脅迫以及ABA的誘導(dǎo)。2)對SlCIN3進(jìn)行生物信息學(xué)分析,我們發(fā)現(xiàn)它編碼一個(gè)等電點(diǎn)為8.18具有653個(gè)氨基酸殘基的蛋白質(zhì),其分子量是74.46kDa。通過構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹發(fā)現(xiàn)SlCIN3被分類為α亞族,亞細(xì)胞定... 

【文章來源】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

線粒體A/N-Invs與mtHXK作用模式圖

沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文T(http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)分析確保引物a 公司合成。選擇合適的內(nèi)參引物 Actin-F 和 Actin-R(CFX96，美國 Bio-Rad)進(jìn)行 qRT-PCR 反應(yīng)。采用 SYt Tip Green qPCR SuperMix，TIANGEN)，反應(yīng)體系如據(jù)用 2-△△Ct方法進(jìn)行分析。表 2-4 qRT-PCR 反應(yīng)體系Table 2-4 qRT-PCR reaction system組成成分Composition使Volum2×SYBG Green Mix 9cDNA 2正向引物 F 1反向引物 R 1RNase-Free ddH2O 補(bǔ)足到

用元件的分析(Patrice et al., 2002)。將獲得的結(jié)果，利用 Exc載體構(gòu)建目的片段基因組數(shù)據(jù)庫(http:solgenomics.net/)中 SlCIN3 的 cDNA 序計(jì)特異擴(kuò)增引物，含有 NcoI 酶切位點(diǎn)的 pET32a-SlCIN3-F 和2a-SlCIN3-R(附錄 2)，以 cDNA 為模板，利用 PCR 擴(kuò)增技術(shù)如表 2-5 所示。PCR 反應(yīng)程序如圖 2-2 所示。表 2-5 PCR 擴(kuò)增反應(yīng)體系Table 2-5 PCR amplification reaction system組成成分Composition使用量Volume of use高保真 DNA 聚合酶 10 μL正向引物 F 1 μL反向引物 R 1 μLcDNA 2 μLRNase-Free ddH2O 補(bǔ)足到 20 μL

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]蔗糖轉(zhuǎn)化酶家族基因進(jìn)化、表達(dá)及對草莓果實(shí)糖分積累的影響[J]. 張玲,王延秀,高清華,段可.  園藝學(xué)報(bào). 2017(06)
[2]番茄HSP20基因家族的全基因組鑒定、系統(tǒng)進(jìn)化及表達(dá)分析[J]. 張寧,姜晶,史潔瑋.  沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2017(02)
[3]木薯堿性/中性轉(zhuǎn)化酶MeNINV1基因啟動(dòng)子的克隆及激素應(yīng)答表達(dá)分析[J]. 王運(yùn)林,姚遠(yuǎn),耿夢婷,孫沖,尚璐,李瑞梅,符少萍,胡新文,郭建春.  分子植物育種. 2017(02)
[4]茶樹中性/堿性轉(zhuǎn)化酶基因CsINV10的克隆與表達(dá)分析[J]. 錢文俊,岳川,曹紅利,郝心愿,王璐,王玉春,黃玉婷,王博,王新超,肖斌,楊亞軍.  作物學(xué)報(bào). 2016(03)
[5]甘蔗中性/堿性轉(zhuǎn)化酶基因SoNIN1的克隆和表達(dá)分析[J]. �？∑�,王愛勤,黃靜麗,楊麗濤,李楊瑞.  作物學(xué)報(bào). 2014(02)
[6]番茄果實(shí)生長發(fā)育過程中糖的代謝[J]. 劉以前,沈火林,石正強(qiáng).  華北農(nóng)學(xué)報(bào). 2006(03)
[7]番茄果實(shí)發(fā)育過程中糖的變化與相關(guān)酶活性的關(guān)系[J]. 齊紅巖,李天來,張潔,劉海濤.  園藝學(xué)報(bào). 2006(02)
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碩士論文
[1]Sly-miR168α調(diào)控番茄鉀養(yǎng)分吸收和利用的功能驗(yàn)證[D]. 劉楊.沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[2]SlSWEET12c和SlSWEET14在番茄果實(shí)成熟期糖轉(zhuǎn)運(yùn)與積累中的作用[D]. 程杰.沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[3]木薯堿性/中性轉(zhuǎn)化酶nINV1基因功能的初步研究[D]. 孫沖.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué) 2017



本文編號(hào)：3518893