目的:白細胞介素-23（interleukin-23,IL-23）是IL-12分子家族中的促炎細胞因子,在炎性和自身免疫性疾病中起到重要的病理作用。IL-23R（interleukin-23 receptor）是IL-23的特異受體,可特異性傳導(dǎo)IL-23刺激所產(chǎn)生的信號,在固有免疫與適應(yīng)性免疫之間起到重要的調(diào)節(jié)作用。草魚是我國最重要的淡水養(yǎng)殖品種,但其易遭受細菌、病毒和寄生蟲等病原的感染,引發(fā)炎癥乃至死亡。本研究旨在克隆草魚IL-23R基因,分析其基因結(jié)構(gòu),明確其在草魚生理及病理條件下基因表達模式的變化,揭示該基因在草魚腸道炎癥進程中的表達特征及作用。方法:（1）運用RACE技術(shù)克隆草魚IL-23R全長cDNA,基于表達載體pET-28a（+）和大腸桿菌原核表達系統(tǒng)表達重組IL-23R蛋白,利用重組蛋白帶有6個組氨酸（6 × His）標簽的特性,使用Ni-NTA螯合親和層析法純化變性后的目的蛋白,然后將其梯度透析復(fù)性,最終獲得具有生物活性的重組草魚IL-23R蛋白（rgcIL-23R）。（2）以割膠純化的rgcIL-23R為免疫原,制備抗草魚IL-23R多克隆抗體（rgcIL-23R... 

【文章來源】：蘇州大學(xué)江蘇省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：126 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１草魚／Ｌ－２Ｗ？部分序列擴增產(chǎn)物的電泳分析??；主：Ｍ，ＤＮＡ?分子量標準（ＴａＫａＲａ?公司?１００?ｂｐ?ＤＮＡ?ｌａｄｄｅｒ）??

ｔｒａｐ??ｖａｌｕｅ?ａｓ?ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｓ?ｏｆ?１，０００?ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．?Ｉｎ?ｔｈｉｓ?ｔｒｅｅ，?ｂｒａｎｃｈｅｓ?ａｒｅ?ｓｈｏｗｎ?ｗｈｅｎ?ｔｈｅｉｒ?ｂｏｏｔｓｔｒａｐ??ｖａｌｕｅｓ?ａｒｅ?ｇｒｅａｔｅｒ?ｔｈａｎ?６０％．??２．２草魚重組１Ｌ－２３Ｒ蛋白的原核表達??通過ＳＤＳ－ＰＡＧＥ檢測，表達菌ｐＥＴ－２８ａ（＋）－／Ｚ－２３ｉ？／ＢＬ２１經(jīng)終濃度為１?ｍＭ的??ＩＰＴＧ于１５°Ｃ誘導(dǎo)２０ｈ后，在接近７０ｋＤａ處有一明顯加粗的蛋白條帶（圖１－９泳??道４箭頭所指），與ＳＭＡＲＴ等在線工具預(yù)測融合蛋白的大�。叮福�?ｋＤａ對應(yīng)。??ｋＤａ?Ｍ?１?２?３?４??＇總＂??１５０??１〇〇＾＾?＾一??７０?一?一?．麵??ＳＯ?一?碰？麟??３?５?＾??２５?－??圖１－９原核表達的ｒｇｃｌＬ－２３Ｒ?ＳＤＳ－ＰＡＧＥ電泳分析??注：Ｍ，ｍａｒｋｅｒ（ｋＤａ）；泳道】，ＢＬ２１誘導(dǎo)后菌體總蛋白；泳道２，?ｐＥＴ－２８ａ（＋）／ＢＬ２１誘導(dǎo)后菌??體總蛋白；泳道?３，ｐＥＴ－２８ａ（＋）－ＩＬ－２３Ｒ／ＢＬ２１?誘導(dǎo)前菌體總蛋白；泳道?４，?ｐＥＴ－２８ａ（＋）－ＩＬ－２３Ｒ／ＢＬ２１??誘導(dǎo)后菌體總蛋白??Ｆｉｇ．?１－９?ＳＤＳ－ＰＡＧＥ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｒｇｃＩＬ－２３Ｒ?ｇｅｎｅｒａｔｅｄ?ｂｙ?Ｅ．?ｃｏｌｉ?ＢＬ２１?（ＤＥ３）??Ｎｏｔｅｓ：?Ｍ，?Ｐｒｏｔｅｉｎ?ｍａｒｋｅｒ?（ｋＤａ）；?Ｌａｎｅ?１，?ｗｈｏｌｅ?ｃｅｌｌ?ｌｙｓａｔｅ?ｏｆ?ｉｎｄｕｃｅｄ?ＢＬ２１；?Ｌａｎｅ?２，?ｗｈｏｌｅ?ｃｅｌｌ??ｌｙｓａｔ

第二章草魚丨Ｌ－２３Ｒ活性蛋白及其多克隆抗體的制備?草魚丨Ｌ－２３Ｒ基因的克隆及其在腸道炎癥中的作用??ｋＤａ?Ｍ?１?２?３?４?５?６??１?（＼ｒ＼?—??，??１ＵＵ？？浐一＊?？Ｖ；??ａ?ｍ??３５?．，，娜?｜｜Ｍ（??２５?“??圖２－１?ｒｇｃＩＬ－２３Ｒ蛋白的可溶性分析??注：ＭＭａｒｋｅｒ?（ｋＤａ）?；?ｌ．ｒｇｃＩＬ－２３Ｒ誘導(dǎo)前菌體總蛋白；２．?ｒｇｃＩＬ－２３Ｒ誘導(dǎo)后菌體總蛋白：３．??超聲后上清；４．超聲后沉淀；５．?ＢＬ２１誘導(dǎo)后菌體總蛋白；６．ｐＥＴ－２８ａ（＋）／ＢＬ２１誘導(dǎo)后菌體總??蛋白。??Ｆｉｇ．?２－１?Ｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｒｇｃＩＬ－２３Ｒ?ｐｒｏｔｅｉｎ??Ｎｏｔｅｓ：?Ｍ，?Ｐｒｏｔｅｉｎ?ｍａｒｋｅｒ?（ｋＤａ）；?Ｌａｎｅ?１，?ｗｈｏｌｅ?ｃｅｌｌ?ｌｙｓａｔｅ?ｏｆ?ｕｎｉｎｄｕｃｅｄ?ｐＥＴ－２８ａ（＋）－ＩＬ－２３Ｒ／ＢＬ２１；??Ｌａｎｅ?２，?ｗｈｏｌｅ?ｃｅｌｌ?ｌｙｓａｔｅ?ｏｆ?ｉｎｄｕｃｅｄ?ｐＥＴ－２８ａ（＋）－ＩＬ－２３ＲｙＢＬ２１；?Ｌａｎｅ?３，?Ｓｕｐｅｒｎａｔｅ?ａｆｔｅｒ?ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ??ｔｒｅａｔｍｅｎｔ；?Ｌａｎｅ?４．?Ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｅ?ａｆｔｅｒ?ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ；?Ｌａｎｅ?５，?ｗｈｏｌｅ?ｃｅｌｌ?ｌｙｓａｔｅ?ｏｆ?ｉｎｄｕｃｅｄ?ＢＬ２１：??Ｌａｎｅ?６．?ｗｈｏｌｅ?ｃｅｌｌ?ｌｙｓａｔｅ?ｏｆ?ｉｎｄｕｃｅｄ?ｐＥＴ－２８ａ（＋）／ＢＬ２１．??２．２Ｎｉ－ＮＴＡ純化后ｒｇｃｌＬ－２３Ｒ的濃度、純度檢測及鑒定??１?）純度檢測：如圖２－２所

【參考文獻】：
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本文編號：3515741