目的:1、研究在人結(jié)直腸癌LOVO細(xì)胞中,慢病毒轉(zhuǎn)染過表達(dá)TCF21對KISS1基因表達(dá)水平的影響。2、觀察慢病毒轉(zhuǎn)染過表達(dá)TCF21后,結(jié)直腸癌LOVO細(xì)胞增殖、侵襲及遷移能力等生物學(xué)變化。3、分析TCF21慢病毒過表達(dá)結(jié)直腸癌LOVO細(xì)胞后,KISS1下游可能的PI3K/AKT-MMPs信號軸中關(guān)鍵分子PI3K、AKT、p-AKT、MMP-2、MMP-9等的表達(dá)情況。方法:1、以TCF21低表達(dá)的人結(jié)直腸癌細(xì)胞株LOVO為研究對象,采用慢病毒感染系統(tǒng)構(gòu)建TCF21基因過表達(dá)穩(wěn)定細(xì)胞株,分別通過實(shí)時熒光定量PCR和免疫印跡的方法檢測細(xì)胞株中轉(zhuǎn)染前后TCF21mRNA水平和蛋白水平的表達(dá),鑒定TCF21在各細(xì)胞株中表達(dá)穩(wěn)定性從而進(jìn)行后續(xù)的研究。2、實(shí)驗(yàn)設(shè)置空白對照組、陰性對照組（空載體對照組）、TCF21基因過表達(dá)細(xì)胞組,通過免疫印跡的方法檢測轉(zhuǎn)染前后KISS1的蛋白表達(dá)水平的變化。3、用MTT的方法分析不同分組中結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖的能力的變化;采用劃痕和Transwell小室等功能學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞轉(zhuǎn)移和侵襲的能力的變化。4、應(yīng)用免疫印跡方法檢查轉(zhuǎn)染前后各組中PI3K/AKT-MMP9信號... 

【文章來源】：福建醫(yī)科大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

慢病毒感染前后細(xì)胞熒光成像圖

圖 2 TCF21 和 GAPDH 基因熔解曲線 圖 3 TCF21 和 GAPDH 基因擴(kuò)增曲線2.2. 慢病毒轉(zhuǎn)染前后，TCF21 在 mRNA 的表達(dá)水平通過統(tǒng)計(jì)分析 RQ 值發(fā)現(xiàn)，TCF21 過表達(dá)組細(xì)胞在 mRNA 水平（14.695.463）的相對表達(dá)量與空白對照組（1.095±0.082）和陰性對照組（0.929±0.063，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），而空白對照組和陰性對照組之間無明顯統(tǒng)差異（P>0.05），說明 TCF21 慢病毒轉(zhuǎn)染了結(jié)直腸癌細(xì)胞后在 mRNA 水平穩(wěn)定過表達(dá)（圖 4，表 1）。

圖 2 TCF21 和 GAPDH 基因熔解曲線 圖 3 TCF21 和 GAPDH 基因擴(kuò)增曲線2.2. 慢病毒轉(zhuǎn)染前后，TCF21 在 mRNA 的表達(dá)水平通過統(tǒng)計(jì)分析 RQ 值發(fā)現(xiàn)，TCF21 過表達(dá)組細(xì)胞在 mRNA 水平（14.695.463）的相對表達(dá)量與空白對照組（1.095±0.082）和陰性對照組（0.929±0.063，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），而空白對照組和陰性對照組之間無明顯統(tǒng)差異（P>0.05），說明 TCF21 慢病毒轉(zhuǎn)染了結(jié)直腸癌細(xì)胞后在 mRNA 水平穩(wěn)定過表達(dá)（圖 4，表 1）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3512606