基于數(shù)字PCR的轉(zhuǎn)基因水稻LL62品系精準(zhǔn)定量檢測方法建立
發(fā)布時間:2021-11-22 18:53
為了促進轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品標(biāo)識制度的順利實施,對未獲我國農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)的轉(zhuǎn)基因水稻LL62品系進行精準(zhǔn)定量檢測方法研究,以保障我國進出口轉(zhuǎn)基因農(nóng)產(chǎn)品的檢測監(jiān)管;谵D(zhuǎn)基因水稻LL62品系外源插入片段和水稻基因組DNA的3’端旁側(cè)序列設(shè)計數(shù)字PCR檢測體系,建立了精準(zhǔn)定量檢測方法。結(jié)果顯示,設(shè)計的引物探針反應(yīng)效率高,基于此建立的數(shù)字PCR方法高度特異于轉(zhuǎn)基因水稻LL62品系檢測;方法可重復(fù)性好,生成微滴數(shù)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)值介于0.60%-11.11%;準(zhǔn)確度高,3個混合樣品(10%、1%和0.1%)測定值與真實值之間的偏差(bias)分別為0.12、0.09和0.10,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)介于0.09%-10.31%。建立的轉(zhuǎn)基因水稻LL62品系微滴數(shù)字PCR定量檢測方法簡便快捷、特異性強、重復(fù)性好、準(zhǔn)確度高,可準(zhǔn)確有效地對農(nóng)產(chǎn)品和食品中轉(zhuǎn)基因水稻LL62成分進行精準(zhǔn)定量分析。
【文章來源】:生物技術(shù)通報. 2016,32(08)北大核心CSCD
【文章頁數(shù)】:8 頁
【文章目錄】:
1 材料與方法
1.1 材料
1.2 方法
1.2.1 DNA提取
1.2.2 混合樣品制備
1.2.3 引物和探針設(shè)計及篩選
1.2.4 微滴式數(shù)字PCR反應(yīng)體系及條件
1.2.5 特異性實驗
1.2.6 可重復(fù)性實驗
1.2.7 準(zhǔn)確度、精確度測定
2 結(jié)果
2.1 核酸提取結(jié)果
2.2 引物探針檢測體系比較
2.3 特異性實驗
2.4 可重復(fù)性實驗
2.5 定量的準(zhǔn)確度、精確度實驗
3 討論
4 結(jié)論
【參考文獻】:
期刊論文
[1]數(shù)字PCR技術(shù)原理及應(yīng)用[J]. 李春勇. 生物技術(shù)世界. 2014(11)
[2]微滴式數(shù)字PCR技術(shù)用于生物樣品種屬鑒定和絕對定量[J]. 胡偉,陳榮華,張晨,安志遠,王斌,平原. 法醫(yī)學(xué)雜志. 2014(05)
[3]利用微滴數(shù)字PCR分析轉(zhuǎn)基因生物外源基因拷貝數(shù)[J]. 姜羽,胡佳瑩,楊立桃. 農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報. 2014(10)
[4]轉(zhuǎn)基因棉花GHB119品系特異性定量PCR檢測方法的建立[J]. 汪秀秀,楊捷琳,宋青,李想,劉月明,潘良文. 農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報. 2014(03)
[5]基于數(shù)字PCR的單分子DNA定量技術(shù)研究進展[J]. 李亮,隋志偉,王晶,臧超,余笑波. 生物化學(xué)與生物物理進展. 2012(10)
[6]轉(zhuǎn)基因玉米NK603品系特異定量PCR檢測方法的建立[J]. 宋君,雷紹榮,劉勇,尹全,王東,向冰,張富麗,劉文娟,常麗娟. 生物技術(shù)通訊. 2012(02)
[7]實時定量PCR檢測轉(zhuǎn)基因水稻科豐6號插入拷貝數(shù)和轉(zhuǎn)基因含量[J]. 王渭霞,賴鳳香,洪利英,傅強. 農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報. 2012(01)
[8]2011年全球生物技術(shù)/轉(zhuǎn)基因作物商業(yè)化發(fā)展態(tài)勢[J]. Clive James. 中國生物工程雜志. 2012(01)
[9]轉(zhuǎn)基因大豆、玉米、油菜和水稻品系特異性檢測質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)分子的快速構(gòu)建及應(yīng)用[J]. 吳永彬,肖維威,張寶,蔡翠霞,康文杰,周琳華,劉唐書,馬文麗. 中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報. 2011(08)
[10]轉(zhuǎn)基因水稻Bt汕優(yōu)63的整合結(jié)構(gòu)和品系特異性定量PCR方法[J]. 蘇長青,謝家建,王奕海,王錫鋒,彭于發(fā). 農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報. 2011(03)
本文編號:3512264
【文章來源】:生物技術(shù)通報. 2016,32(08)北大核心CSCD
【文章頁數(shù)】:8 頁
【文章目錄】:
1 材料與方法
1.1 材料
1.2 方法
1.2.1 DNA提取
1.2.2 混合樣品制備
1.2.3 引物和探針設(shè)計及篩選
1.2.4 微滴式數(shù)字PCR反應(yīng)體系及條件
1.2.5 特異性實驗
1.2.6 可重復(fù)性實驗
1.2.7 準(zhǔn)確度、精確度測定
2 結(jié)果
2.1 核酸提取結(jié)果
2.2 引物探針檢測體系比較
2.3 特異性實驗
2.4 可重復(fù)性實驗
2.5 定量的準(zhǔn)確度、精確度實驗
3 討論
4 結(jié)論
【參考文獻】:
期刊論文
[1]數(shù)字PCR技術(shù)原理及應(yīng)用[J]. 李春勇. 生物技術(shù)世界. 2014(11)
[2]微滴式數(shù)字PCR技術(shù)用于生物樣品種屬鑒定和絕對定量[J]. 胡偉,陳榮華,張晨,安志遠,王斌,平原. 法醫(yī)學(xué)雜志. 2014(05)
[3]利用微滴數(shù)字PCR分析轉(zhuǎn)基因生物外源基因拷貝數(shù)[J]. 姜羽,胡佳瑩,楊立桃. 農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報. 2014(10)
[4]轉(zhuǎn)基因棉花GHB119品系特異性定量PCR檢測方法的建立[J]. 汪秀秀,楊捷琳,宋青,李想,劉月明,潘良文. 農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報. 2014(03)
[5]基于數(shù)字PCR的單分子DNA定量技術(shù)研究進展[J]. 李亮,隋志偉,王晶,臧超,余笑波. 生物化學(xué)與生物物理進展. 2012(10)
[6]轉(zhuǎn)基因玉米NK603品系特異定量PCR檢測方法的建立[J]. 宋君,雷紹榮,劉勇,尹全,王東,向冰,張富麗,劉文娟,常麗娟. 生物技術(shù)通訊. 2012(02)
[7]實時定量PCR檢測轉(zhuǎn)基因水稻科豐6號插入拷貝數(shù)和轉(zhuǎn)基因含量[J]. 王渭霞,賴鳳香,洪利英,傅強. 農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報. 2012(01)
[8]2011年全球生物技術(shù)/轉(zhuǎn)基因作物商業(yè)化發(fā)展態(tài)勢[J]. Clive James. 中國生物工程雜志. 2012(01)
[9]轉(zhuǎn)基因大豆、玉米、油菜和水稻品系特異性檢測質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)分子的快速構(gòu)建及應(yīng)用[J]. 吳永彬,肖維威,張寶,蔡翠霞,康文杰,周琳華,劉唐書,馬文麗. 中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報. 2011(08)
[10]轉(zhuǎn)基因水稻Bt汕優(yōu)63的整合結(jié)構(gòu)和品系特異性定量PCR方法[J]. 蘇長青,謝家建,王奕海,王錫鋒,彭于發(fā). 農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報. 2011(03)
本文編號:3512264
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