鼠害是一種重要的生物災(zāi)害,嚴(yán)重危害人類生活的各個方面。強大的繁殖能力是害鼠暴發(fā)的主要原因之一,但目前對鼠類的繁殖調(diào)控機制尚未完全解析,嚴(yán)重制約了不育控制理論和技術(shù)的發(fā)展。季節(jié)性繁殖是大多數(shù)鼠類采取的一種繁殖策略,性腺表現(xiàn)出年度周期性的膨大與萎縮,尤其是在非繁殖期出現(xiàn)的性腺萎縮現(xiàn)象被稱作“天然不育模型”,具有重要的研究價值。光周期和褪黑素是季節(jié)性繁殖調(diào)控的重要環(huán)境和神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)控因子。課題組前期研究發(fā)現(xiàn),布氏田鼠是一種具有嚴(yán)格季節(jié)繁殖周期的鼠種,漸長光照刺激幼鼠性腺發(fā)育,而漸短光照則起到抑制作用,褪黑素和短光照均可顯著上調(diào)雄鼠下丘腦中Ⅲ型碘甲腺原氨酸脫碘酶基因（Dio3）的表達水平;這說明光周期和褪黑素是調(diào)控布氏田鼠性腺發(fā)育的重要因子,但對其分子調(diào)控機制,并未完全清楚。因此,本論文以雄性布氏田鼠為研究對象,主要針對3個問題開展研究:1)下丘腦中季節(jié)性繁殖相關(guān)基因[]的空間分布特征如何;2)長期注射褪黑素對雄鼠性腺和下丘腦中基因表達的發(fā)育特征的影響如何;3)啟動子區(qū)甲基化水平是否與短光照上調(diào)下丘腦Dio3表達有關(guān)。主要結(jié)果如下:1.利用冷凍切片分離6、8、11周齡成年雄鼠下丘腦腦區(qū),以qP... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

下丘腦-垂體-性腺軸的季節(jié)性變化（仿YOUNGetal.,2001)

中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文第二章材料與方法9第二章材料與方法2.1實驗設(shè)計2.1.1實驗動物本實驗動物親本來源于內(nèi)蒙古錫林郭勒典型草原區(qū)的野生布氏田鼠種群，在實驗室已經(jīng)歷飼養(yǎng)繁殖10年以上。實驗選用健康的個體，以鋸末和刨花為墊料，飼養(yǎng)于自然光照下（北京），溫度為20±2℃，水、飼料（北京市房山希望飼料有限責(zé)任公司）供應(yīng)充足。2.1.2實驗一：下丘腦基因表達的腦區(qū)空間分布特征將出生并飼養(yǎng)于長光照中6周、8周和11周齡的雄性布氏田鼠處死后取全腦，置于干冰速凍，保存于-80℃下直至切片。切片時，將全腦樣本固定在冷凍切片機上，刀頭溫度選擇-12℃，切片厚度為120μm，切好的腦片固定于載玻片上。腦區(qū)識別參考小鼠腦圖譜（FRANKLINetal.,1997），分辨AVPV區(qū)、DMH區(qū)、3V區(qū)、ARC區(qū)的具體位置（圖2-1）。用滅菌后的刀片分離特定腦區(qū)，分離的腦區(qū)樣本放置在1.5mL的離心管，保存在-80℃至RNA提齲圖2-1各個腦區(qū)空間分布位置圖（仿FRANKLINetal.,1997）Fig.2-3Spatiallocationmapofvariousbrainregions注：A代表AVPA區(qū)；B代表DMH區(qū)；C代表第三腦室；D代表ARC區(qū)。Note:A,AVPV;B,DMH;C,Thirdventricle;D,ARC.2.1.3實驗二：褪黑素處理對性腺和下丘腦基因表達的影響以出生于長光照（16h光照/24h）的幼年（4周齡）雄性布氏田鼠作為研究對象，采用皮下注射褪黑素的處理方法。取72只雄鼠，均分為3個劑量組（每只每天0μg、6μg和50μg），注射時間為黑暗相位來臨前3小時注射，在處理2周、4周和7周時取樣，每組8只，記錄體重、性腺（睪丸、儲精囊）重量。全腦-80℃保存，留待腦區(qū)分離與基因表達量測定。

中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文第二章材料與方法10圖2-2長期褪黑素皮下注射實驗設(shè)計示意圖Fig.2-2Schematicdesignofexperimentaldesigninlong-termsubcutaneousinjectionofmelatonin2.1.4實驗三：光周期處理對下丘腦Dio3基因表達及啟動子區(qū)甲基化的影響光周期處理采用漸變光周期處理，自秋季（9月1日）開始，起始晝長為12h，分為漸短晝長組（-3min/day）和漸長晝長組（+3min/day）。雌雄親本配對1周后移入兩個光周期處理條件下，光周期處理一直持續(xù)到子代出生后12周，取樣時間為4、8和12周齡。具體實驗流程見圖2-3。取樣時記錄體重和性腺重量，即雌鼠記錄卵巢和子宮重量，雄鼠記錄睪丸和儲精囊重量；分離下丘腦保存于-80℃，以待后期基因表達量檢測和甲基化水平分析。圖2-3光周期處理流程圖Fig.2-3Flowchartofphotoperiodictreatment2.2實驗材料2.2.1主要試劑（1）共提取試劑盒：DNA/RNAMiniKit（QIAGEN公司）（2）RNA提取試劑盒：Direct-zolRNAMiniprep（ZYMOResearch公司）（3）反轉(zhuǎn)錄試劑：TransScriptOne-StepGdnaRemovalandcDNASynthesisSuperMix（TransGenBiotech公司）

【參考文獻】：
期刊論文
[1]糞便激素水平反映不同出生時期雄性布氏田鼠的繁殖策略[J]. 郝偉麗,王大偉,任飛,胡祥發(fā),田林,李寧,劉曉輝.  獸類學(xué)報. 2016(04)
[2]左炔諾孕酮和炔雌醚復(fù)合物（EP-1）及組分對鼠類不育效果的研究進展[J]. 張知彬.  獸類學(xué)報. 2015(02)
[3]不育控制技術(shù)在有害鼠類防控中的研究進展[J]. 陳雅娟,張博,靳鐵治,陳曉寧,廉振民.  陜西農(nóng)業(yè)科學(xué). 2014(12)
[4]DNA甲基化與基因表達調(diào)控研究進展[J]. 史玉杰,李慶賀,劉曉輝.  中國生物工程雜志. 2013(07)
[5]哺乳動物季節(jié)性繁殖的神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)節(jié)機制[J]. 賴平,王憑青,張寶云,儲明星,劉重旭,譚穎,樊奇.  遺傳. 2012(03)
[6]繁殖季節(jié)和非繁殖季節(jié)布氏田鼠種群參數(shù)和生理特點的差異[J]. 王大偉,叢林,王宇,劉曉輝.  生態(tài)學(xué)報. 2010(13)
[7]一對褐家鼠一年內(nèi)可繁殖多少后代?[J]. 曾粵宗.  中國媒介生物學(xué)及控制雜志. 2003(05)
[8]布氏田鼠標(biāo)志種群的繁殖參數(shù)[J]. 宛新榮,王夢軍,王廣和,劉偉,鐘文勤.  獸類學(xué)報. 2002(02)
[9]布氏田鼠種群繁殖特征研究[J]. 劉志龍,孫儒泳.  獸類學(xué)報. 1993(02)
[10]布氏田鼠在我國的分布及其與植被和水熱條件關(guān)系的初步探討[J]. 施大釗.  獸類學(xué)報. 1988(04)

碩士論文
[1]雄性布氏田鼠光響應(yīng)及繁殖相關(guān)基因表達的季節(jié)性特點[D]. 任飛.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2014



本文編號：3505012