四氫嘧啶是一種天然存在的相容性溶質(zhì),它存在于許多不同種類的微生物中。它既可以調(diào)節(jié)微生物胞內(nèi)外滲透壓平衡,又可以穩(wěn)定酶活性、保護(hù)細(xì)胞抵抗外界極端環(huán)境（凍融、干燥、電離輻射、高溫等）,還可以作為氧化劑防止細(xì)胞膜功能受損,并且可以用于治療神經(jīng)退行性疾病。由于其具有優(yōu)良的保護(hù)特性,四氫嘧啶在生物技術(shù)、皮膚護(hù)理、生物醫(yī)藥等行業(yè)市場(chǎng)前景非常廣闊。實(shí)驗(yàn)室前期構(gòu)建了一株大腸桿菌四氫嘧啶工程菌ECT01（Escherichia coli W3110 ybeM::PT7-ectABC,tyrR::PT7-ectABC）,此菌株存在糖酸轉(zhuǎn)化率低、代謝網(wǎng)絡(luò)不夠完善等問題。為了解決上述問題,本文通過CRISPRi技術(shù)干擾合成代謝基因表達(dá),進(jìn)一步提高了四氫嘧啶生產(chǎn)菌的轉(zhuǎn)化率和產(chǎn)量。本研究完成了以下工作:1、為了提高四氫嘧啶產(chǎn)量及轉(zhuǎn)化率,利用CRISPRi技術(shù)干擾合成代謝基因表達(dá)。首先將dcas9基因（表達(dá)dCas9蛋白,結(jié)合于靶位點(diǎn)干擾基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)）整合至基因組yncI位點(diǎn)。由于菌株ECT01中使用PxylF,故將dcas9基因受控于PxylF,構(gòu)建了菌株ECT02（ECT01,yncI::PxylF-dcas9... 

【文章來源】：天津科技大學(xué)天津市

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１四氫卩密陡結(jié)構(gòu)式??

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【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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本文編號(hào)：3503675