本文關(guān)鍵詞：農(nóng)桿菌介導(dǎo)的谷氧還蛋白基因CsGRX4對黃瓜遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：轉(zhuǎn)基因技術(shù)在黃瓜上的應(yīng)用一直受再生頻率和遺傳轉(zhuǎn)化頻率低的限制,難以提高遺傳轉(zhuǎn)化頻率。因此,建立一個高效的遺傳轉(zhuǎn)化體系并進(jìn)行基因的遺傳轉(zhuǎn)化對黃瓜抗病新種質(zhì)的創(chuàng)制及轉(zhuǎn)基因研究具有十分重要的意義。本研究以津研四號和長春密刺為實(shí)驗(yàn)材料,利用黃瓜子葉節(jié)為外植體,在優(yōu)化黃瓜再生體系的基礎(chǔ)上,通過根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法利用黃瓜谷氧還蛋白基因CsGRX4對黃瓜進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化,并對各種影響遺傳轉(zhuǎn)化的因素進(jìn)行優(yōu)化,為黃瓜的高頻遺傳轉(zhuǎn)化奠定基礎(chǔ)。本試驗(yàn)的主要結(jié)果如下:1.在原有的基礎(chǔ)上優(yōu)化了黃瓜的再生體系。津研四號的最佳芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基附加3.0 mg/L 6-BA+1.5 mg/L ABA+1.5 mg/L AgNO3,出芽率和每外植體出芽數(shù)分別達(dá)到了90.00%和2.71;長春密刺的最佳芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基附加2.0 mg/L6-BA+1.0 mg/L ABA+1.5 mg/L AgNO3,出芽率和每外植體出芽數(shù)分別達(dá)到了87.22%和2.53;無菌苗的適宜苗態(tài)為種皮完全脫落,子葉未展開;子葉節(jié)最優(yōu)的切割方式為下胚軸縱切,保留單片子葉,切除子葉三分之二,去除頂芽,保留1 mm葉柄;外植體最佳的接種方式為葉背向下微斜插入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中;2.確定了黃瓜子葉節(jié)遺傳轉(zhuǎn)化的Basta的篩選壓為3.0 mg/L;選擇頭孢霉素濃度500mg/L作為芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的抑菌濃度;3.確定了預(yù)培養(yǎng)時間及農(nóng)桿菌菌液濃度等影響遺傳轉(zhuǎn)化的因素的最優(yōu)處理。最佳預(yù)培時間為2-3 d;農(nóng)桿菌侵染的最佳濃度為0.4;農(nóng)桿菌的最佳侵染時間為10 min;最佳共培養(yǎng)時間為2 d;農(nóng)桿菌菌液中乙酰丁香酮的最佳添加濃度為1.0 g/L。4.進(jìn)行了抗性株的移栽及抗性篩選和PCR檢測。得到津研四號抗性株12株,Basta噴施后成活率為0;獲得長春密刺抗性植株15株,皆為陰性株。
【關(guān)鍵詞】：黃瓜 再生 CsGRX4 遺傳轉(zhuǎn)化 根癌農(nóng)桿菌
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S642.2
【目錄】：

• 摘要6-7
• ABSTRACT7-12
• 第一章 文獻(xiàn)綜述12-17
• 1.1 黃瓜再生的研究進(jìn)展12-14
• 1.1.1 基因型12-13
• 1.1.2 外植體類型13
• 1.1.3 苗齡和苗態(tài)13-14
• 1.1.4 激素種類14
• 1.1.5 其它試劑14
• 1.2 黃瓜遺傳轉(zhuǎn)化研究進(jìn)展14-15
• 1.2.1 遺傳轉(zhuǎn)化的方法14
• 1.2.2 黃瓜遺傳轉(zhuǎn)化現(xiàn)狀14-15
• 1.2.3 影響遺傳轉(zhuǎn)化效率的因素15
• 1.2.4 農(nóng)桿菌遺傳轉(zhuǎn)化存在問題15
• 1.3 谷氧還蛋白簡介15-16
• 1.4 本研究的目的與意義16-17
• 第二章 黃瓜再生體系的建立17-29
• 2.1 材料與方法17-20
• 2.1.1 試驗(yàn)材料17
• 2.1.2 試驗(yàn)方法17-20
• 2.2 結(jié)果與討論20-26
• 2.2.1 消毒體系的建立20-21
• 2.2.2 不同的外植體種類對再生的影響21-22
• 2.2.3 外植體切割及接種方式對再生的影響22-23
• 2.2.4 不同苗態(tài)對再生的影響23-24
• 2.2.5 不同激素配比對再生的影響24
• 2.2.6 硝酸銀對再生的影響24-25
• 2.2.7 不同濃度激素對芽伸長的影響25
• 2.2.8 不同培養(yǎng)基配方對生根的影響25-26
• 2.3 討論26-28
• 2.3.1 黃瓜種子消毒體系26
• 2.3.2 不同的外植體類型26-27
• 2.3.3 外植體切割及接種方式27
• 2.3.4 外植體的苗態(tài)27
• 2.3.5 激素配比及其他添加物質(zhì)的影響27-28
• 2.4 結(jié)論28-29
• 2.4.1 建立了黃瓜種子的最優(yōu)消毒體系28
• 2.4.2 優(yōu)化了黃瓜的再生體系28-29
• 第三章 黃瓜遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立29-45
• 3.1 材料與方法29-32
• 3.1.1 試驗(yàn)材料29
• 3.1.2 試驗(yàn)方法29-32
• 3.2 結(jié)果與分析32-42
• 3.2.1 Basta篩選壓的確定32-34
• 3.2.2 頭孢霉素（Cef）對外植體生長的影響34-35
• 3.2.3 預(yù)培養(yǎng)時間對遺傳轉(zhuǎn)化的影響35
• 3.2.4 農(nóng)桿菌濃度對遺傳轉(zhuǎn)化的影響35-36
• 3.2.5 農(nóng)桿菌侵染時間對遺傳轉(zhuǎn)化的影響36-37
• 3.2.6 共培養(yǎng)時間對遺傳轉(zhuǎn)化的影響37-38
• 3.2.7 不同苗態(tài)對遺傳轉(zhuǎn)化的影響38
• 3.2.8 子葉黃化與否對遺傳轉(zhuǎn)化的影響38-39
• 3.2.9 外植體的切割及接種方式對遺傳轉(zhuǎn)化的影響39-40
• 3.2.10 乙酰丁香酮對遺傳轉(zhuǎn)化的影響40-41
• 3.2.11 Basta噴施檢測41-42
• 3.2.12 PCR檢測42
• 3.3 討論42-44
• 3.3.1 Basta篩選壓的確定42
• 3.3.2 Cef抑菌濃度的確定42-43
• 3.3.3 預(yù)培養(yǎng)時間43
• 3.3.4 共培養(yǎng)時間43
• 3.3.5 感菌時間及農(nóng)桿菌濃度43
• 3.3.6 外植體切割以及接種方式43
• 3.3.7 苗態(tài)43-44
• 3.3.8 外源物質(zhì)的添加44
• 3.3.9 轉(zhuǎn)基因植株的檢測44
• 3.4 結(jié)論44-45
• 第四章 結(jié)論45-46
• 4.1 再生體系的建立45
• 4.2 遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立45-46
• 參考文獻(xiàn)46-49
• 致謝49-50
• 作者簡介50

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李新生;怎樣選擇冬棚黃瓜品種[J];四川農(nóng)業(yè)科技;2000年12期

2 ;怎樣選種冬棚黃瓜品種[J];華夏星火;2000年07期

3 ;耐熱黃瓜天津育成[J];農(nóng)村實(shí)用技術(shù)與信息;2001年05期

4 梅再勝,高先愛,陸家林,劉明智,徐德安;鄂黃瓜一號新品種的選育[J];蔬菜;2001年04期

5 陳祥楓;大棚二茬黃瓜怎么種[J];鄉(xiāng)鎮(zhèn)論壇;2001年07期

6 吳潔遠(yuǎn);白皮黃瓜春早熟高效栽培與加工[J];廣西農(nóng)學(xué)報;2002年04期

7 習(xí)永和;秋延后黃瓜的采收與貯藏[J];蔬菜;2002年09期

8 郭志玲,徐技;上海地區(qū)黃瓜主栽品種的選育和展望[J];上海蔬菜;2002年03期

9 王孝琴,胡云海;三個耐寒黃瓜品種簡介[J];長江蔬菜;2003年11期

10 張振林;兩個優(yōu)質(zhì)超高產(chǎn)日本黃瓜品種[J];農(nóng)村百事通;2003年23期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 樊榮;周清;;植物聲頻控制技術(shù)對黃瓜生長特性影響的研究[A];紀(jì)念中國農(nóng)業(yè)工程學(xué)會成立30周年暨中國農(nóng)業(yè)工程學(xué)會2009年學(xué)術(shù)年會（CSAE 2009）論文集[C];2009年

2 程奕;孟兆芳;李淑菊;張璽;霍振榮;龐金安;馬德華;;不同黃瓜品種養(yǎng)分吸收特性的研究[A];紀(jì)念天津科潤黃瓜研究所建所二十五周年論文摘要集（2001—2010）[C];2010年

3 周秀艷;秦智偉;;黃瓜品種資源商品性的評價[A];中國園藝學(xué)會第十屆會員代表大會暨學(xué)術(shù)討論會論文集[C];2005年

4 沈鏑;李錫香;王海平;宋江萍;;黃瓜種質(zhì)資源研究進(jìn)展與展望[A];全國蔬菜和薯類種質(zhì)資源研究與利用研討會論文集[C];2006年

5 張亞平;胥愛玲;;黃瓜品種間抗病性與葉綠素含量的關(guān)系及其遺傳性[A];中國園藝學(xué)會首屆青年學(xué)術(shù)討論會論文集[C];1994年

6 繆e

本文編號：350066