本文關鍵詞：農(nóng)桿菌介導的谷氧還蛋白基因CsGRX4對黃瓜遺傳轉化體系的建立，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：轉基因技術在黃瓜上的應用一直受再生頻率和遺傳轉化頻率低的限制,難以提高遺傳轉化頻率。因此,建立一個高效的遺傳轉化體系并進行基因的遺傳轉化對黃瓜抗病新種質的創(chuàng)制及轉基因研究具有十分重要的意義。本研究以津研四號和長春密刺為實驗材料,利用黃瓜子葉節(jié)為外植體,在優(yōu)化黃瓜再生體系的基礎上,通過根癌農(nóng)桿菌介導法利用黃瓜谷氧還蛋白基因CsGRX4對黃瓜進行遺傳轉化,并對各種影響遺傳轉化的因素進行優(yōu)化,為黃瓜的高頻遺傳轉化奠定基礎。本試驗的主要結果如下:1.在原有的基礎上優(yōu)化了黃瓜的再生體系。津研四號的最佳芽誘導培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基附加3.0 mg/L 6-BA+1.5 mg/L ABA+1.5 mg/L AgNO3,出芽率和每外植體出芽數(shù)分別達到了90.00%和2.71;長春密刺的最佳芽誘導培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基附加2.0 mg/L6-BA+1.0 mg/L ABA+1.5 mg/L AgNO3,出芽率和每外植體出芽數(shù)分別達到了87.22%和2.53;無菌苗的適宜苗態(tài)為種皮完全脫落,子葉未展開;子葉節(jié)最優(yōu)的切割方式為下胚軸縱切,保留單片子葉,切除子葉三分之二,去除頂芽,保留1 mm葉柄;外植體最佳的接種方式為葉背向下微斜插入芽誘導培養(yǎng)基中;2.確定了黃瓜子葉節(jié)遺傳轉化的Basta的篩選壓為3.0 mg/L;選擇頭孢霉素濃度500mg/L作為芽誘導培養(yǎng)基的抑菌濃度;3.確定了預培養(yǎng)時間及農(nóng)桿菌菌液濃度等影響遺傳轉化的因素的最優(yōu)處理。最佳預培時間為2-3 d;農(nóng)桿菌侵染的最佳濃度為0.4;農(nóng)桿菌的最佳侵染時間為10 min;最佳共培養(yǎng)時間為2 d;農(nóng)桿菌菌液中乙酰丁香酮的最佳添加濃度為1.0 g/L。4.進行了抗性株的移栽及抗性篩選和PCR檢測。得到津研四號抗性株12株,Basta噴施后成活率為0;獲得長春密刺抗性植株15株,皆為陰性株。
【關鍵詞】：黃瓜 再生 CsGRX4 遺傳轉化 根癌農(nóng)桿菌
【學位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S642.2
【目錄】：

• 摘要6-7
• ABSTRACT7-12
• 第一章 文獻綜述12-17
• 1.1 黃瓜再生的研究進展12-14
• 1.1.1 基因型12-13
• 1.1.2 外植體類型13
• 1.1.3 苗齡和苗態(tài)13-14
• 1.1.4 激素種類14
• 1.1.5 其它試劑14
• 1.2 黃瓜遺傳轉化研究進展14-15
• 1.2.1 遺傳轉化的方法14
• 1.2.2 黃瓜遺傳轉化現(xiàn)狀14-15
• 1.2.3 影響遺傳轉化效率的因素15
• 1.2.4 農(nóng)桿菌遺傳轉化存在問題15
• 1.3 谷氧還蛋白簡介15-16
• 1.4 本研究的目的與意義16-17
• 第二章 黃瓜再生體系的建立17-29
• 2.1 材料與方法17-20
• 2.1.1 試驗材料17
• 2.1.2 試驗方法17-20
• 2.2 結果與討論20-26
• 2.2.1 消毒體系的建立20-21
• 2.2.2 不同的外植體種類對再生的影響21-22
• 2.2.3 外植體切割及接種方式對再生的影響22-23
• 2.2.4 不同苗態(tài)對再生的影響23-24
• 2.2.5 不同激素配比對再生的影響24
• 2.2.6 硝酸銀對再生的影響24-25
• 2.2.7 不同濃度激素對芽伸長的影響25
• 2.2.8 不同培養(yǎng)基配方對生根的影響25-26
• 2.3 討論26-28
• 2.3.1 黃瓜種子消毒體系26
• 2.3.2 不同的外植體類型26-27
• 2.3.3 外植體切割及接種方式27
• 2.3.4 外植體的苗態(tài)27
• 2.3.5 激素配比及其他添加物質的影響27-28
• 2.4 結論28-29
• 2.4.1 建立了黃瓜種子的最優(yōu)消毒體系28
• 2.4.2 優(yōu)化了黃瓜的再生體系28-29
• 第三章 黃瓜遺傳轉化體系的建立29-45
• 3.1 材料與方法29-32
• 3.1.1 試驗材料29
• 3.1.2 試驗方法29-32
• 3.2 結果與分析32-42
• 3.2.1 Basta篩選壓的確定32-34
• 3.2.2 頭孢霉素（Cef）對外植體生長的影響34-35
• 3.2.3 預培養(yǎng)時間對遺傳轉化的影響35
• 3.2.4 農(nóng)桿菌濃度對遺傳轉化的影響35-36
• 3.2.5 農(nóng)桿菌侵染時間對遺傳轉化的影響36-37
• 3.2.6 共培養(yǎng)時間對遺傳轉化的影響37-38
• 3.2.7 不同苗態(tài)對遺傳轉化的影響38
• 3.2.8 子葉黃化與否對遺傳轉化的影響38-39
• 3.2.9 外植體的切割及接種方式對遺傳轉化的影響39-40
• 3.2.10 乙酰丁香酮對遺傳轉化的影響40-41
• 3.2.11 Basta噴施檢測41-42
• 3.2.12 PCR檢測42
• 3.3 討論42-44
• 3.3.1 Basta篩選壓的確定42
• 3.3.2 Cef抑菌濃度的確定42-43
• 3.3.3 預培養(yǎng)時間43
• 3.3.4 共培養(yǎng)時間43
• 3.3.5 感菌時間及農(nóng)桿菌濃度43
• 3.3.6 外植體切割以及接種方式43
• 3.3.7 苗態(tài)43-44
• 3.3.8 外源物質的添加44
• 3.3.9 轉基因植株的檢測44
• 3.4 結論44-45
• 第四章 結論45-46
• 4.1 再生體系的建立45
• 4.2 遺傳轉化體系的建立45-46
• 參考文獻46-49
• 致謝49-50
• 作者簡介50

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本文編號：350066