目的:通過對乳腺癌及癌旁正常乳腺組織中EphA8的表達(dá)的檢測,并以EphA8為靶點,研究調(diào)節(jié)EphA8基因的表達(dá)對乳腺癌細(xì)胞遷移侵襲的影響,在一定程度上闡明調(diào)控乳腺癌細(xì)胞侵襲遷移的分子機制,明確其在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展中的病理意義。方法:第一部分分析EphA8在乳腺癌中的表達(dá)及與患者預(yù)后的相關(guān)性1.收集南通大學(xué)附屬醫(yī)院150例乳腺癌石蠟組織標(biāo)本及相應(yīng)癌旁組織標(biāo)本（含完整臨床資料和隨訪結(jié)果）制備組織芯片后,用免疫組化檢測腫瘤組織和癌旁組織中EphA8的表達(dá),對比分析。2.檢測EphA8的表達(dá)高低與乳腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系。3.用統(tǒng)計學(xué)軟件分析EphA8的表達(dá)與乳腺癌的發(fā)病及患者預(yù)后的相關(guān)性。第二部分針對EphA8的shRNA抑制乳腺癌生長的體外研究1.體外培養(yǎng)多株乳腺癌細(xì)胞系,用qRT-PCR和WB鑒定篩選出高表達(dá)EphA8的乳腺癌細(xì)胞系。2.設(shè)計并合成4對針對EphA8的干擾靶序列,通過一部分實時定量PCR（qPCR）和免疫印跡（WB）分析這4個shRNA抑制EphA8表達(dá)的效果,篩選出沉默作用最強的一個shRNA片段。3.用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的方法轉(zhuǎn)染EphA8-shRNA至高表達(dá)EphA... 

【文章來源】：蘇州大學(xué)江蘇省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖２－２?ＷＢ結(jié)果表明ＥＰＨＡ８蛋白在ＭＣＦ－７細(xì)胞表達(dá)量最高，在ＭＣＦ－ｌＯＡ細(xì)胞??表達(dá)量最低

辦斤妨基因表達(dá)對乳腺癌細(xì)胞侵襲和遷移影響的相關(guān)機制研究?第三章ＥｐｈＡ８對乳腺癌細(xì)胞侵襲及遷移影響的體外研究??表２－５?Ｒｅａ丨ｔｉｍｅ－ＰＣＲ反應(yīng)體系??Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ?Ｖｏｌｕｍｅ（卩?Ｉ）??ｄｄＨ２０?８．２??ＳｙｂｒＧｒｅｅｎ?ｑＰＣＲ?Ｍａｓｔｅｒ?Ｍｉｘ?（２ｘ）?１０．０??Ｆｏｒｗａｒｄ?ｐｒｉｍｅｒ?１０?｜ｉＭ?０．４??Ｒｅｖｅｒｓｅ?ｐｒｉｍｅｒ?１０?ｐ．Ｍ?０．４??ｃＤＮＡ?１．０??Ｔｏｔａｌ?ｖｏｌｕｍｅ?２０．０??（３）?ＰＣＲ?擴增??擴增條件：９４°Ｃ?１０ｍｉｎ，（９４°Ｃ?２０?秒，５５°Ｃ?２０?秒，７２°Ｃ?２０?秒）４０?個循環(huán)??３．２．１．３實驗結(jié)果??根據(jù)ＲＴ－ＰＣＲ結(jié)果，如圖２－３，?ＮＣ組和ＣＫ組中ＥｐｈＡ８蛋白表達(dá)無明顯變化，??各ｓｈＲＮＡ組中ＥｐｈＡ８蛋白表達(dá)量均出現(xiàn)不同程度降低，其中ｓｈＲＮＡ３的沉默效率最??高，故篩選出ｓｈＲＮＡ３組可用于進(jìn)一步實驗。??１?１?Ｍｅａｎ士?ＳＤ??１．２?ｐ??ｆ?丨ｍ??＿??＾?０．８?－??安（＞？（，－?＿＿，＿??＜??§?＊＊??ｃ?０．４?－?，??Ｃ??００?￣－—??ｒ?０．２?－??〇．〇?１—１￣１???？—Ｉ?１—？???？???Ｌ＿ｊ???ＮＣ?ＣＫ?ｓｈＲＮＡ－１?ｓｈＲＮＡ－２?ｓｈＲＮＡ－３?ｓｈＲＮＡ－４??圖２－３?ＲＴ結(jié)果表明：ｓｈＲＮＡ３沉默效率最高（＊＊：?ｐ＜０．０１）??３．２．２?ＷＢ靶點篩選??２７??

姑基因表達(dá)對乳腺癌細(xì)胞侵襲和遷移影響的相關(guān)機制研究?第二章ＥｐｈＡ８對乳腺癌細(xì)胞侵襲及遷移影響的體外研究??ＦＰＨＡＨ?Ｉ?Ｉ－＇＾１?５Ｄ??０．Ｔ??０．？?＇?；??０．５??ｇ?０．４?［?？＊??？?ｉ?ｓ?ｒｉ?■＊??ｊ?；二?ｍ??０．２??…丨?Ｉ?：??〇。Ｍ?■?１?＊?＇?１，１?ｉ?，?Ｉ?，?：?？??ＨＣ?ＣＫ?ＳＮＲＮＡ１?ＳｈＲＮＡ２?ＳｈｆｔＮＡｌ?ＳｈＲＮＡ＜４??一一?一一?一一??Ｐ－ａｃｔｉｎ?ｍｍｍ?＾?ｍａｍ??圖２－４?ＷＢ結(jié)果顯示：轉(zhuǎn)染后ｓｈＲＮ＾－３組ＥＰＨＡ８蛋白表達(dá)最少，沉默效果最好??３．２．３沉默及ＮＣ穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建??３．２．３．１實驗材料??ＭＣＦ－７?細(xì)胞（ＣＴＣＣ），?１６４０Ｍ?培養(yǎng)基（Ｈｙｃｌｏｎｅ），１０％ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ），ｓｈＲＮＡ－３??細(xì)胞培養(yǎng)箱，倒置顯微鏡，熒光顯微鏡，離心機??３．２＿３＿２實驗方法：??（１）ＭＣＦ－７細(xì)胞加入１６４０培養(yǎng)基，鋪于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，于３７°Ｃ，?５％培養(yǎng)箱培養(yǎng)，??（２）待細(xì)胞長滿后，將細(xì)胞消化后分于６孔板中，達(dá)到８０％黏連后按上述轉(zhuǎn)染方??法，分別轉(zhuǎn)入ＮＣ質(zhì)粒和ｓｈＲＮＡ－３質(zhì)粒；??（３）?２４ｈ觀察細(xì)胞狀況，通過５?｜ｘｇ／ｍｌ的嘌呤霉素篩選含有重組載體的細(xì)胞。??（４）單克隆分眩??３．２Ｊ．３實驗結(jié)果??我們分別用ＮＣ質(zhì)粒和ｓｈＲＮＡ－３質(zhì)粒對ＭＣＦ－７細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染，后通過嘌呤霉素??篩選出可以穩(wěn)定生長的細(xì)胞株用于后續(xù)實驗。（圖２－５）??２９??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Eph及其配體Ephrin在腫瘤轉(zhuǎn)移中的研究進(jìn)展[J]. 祝娉婷,劉兆國,劉玉萍,單云龍,韋忠紅,周梁,陶麗,吳紅雁,曹玉珠,孫麗華,陳文星,王愛云,陸茵.  腫瘤. 2015(06)
[2]乳腺癌中PI3K通路生物標(biāo)記物的臨床療效預(yù)測[J]. 解婕,吳振華,胡夕春.  中國新藥雜志. 2014(24)
[3]膜聯(lián)蛋白家族與胃癌的相關(guān)性研究進(jìn)展[J]. 袁虎方,李勇.  中華實驗外科雜志. 2014 (10)
[4]miR-10a在腫瘤中的研究進(jìn)展[J]. 支勇金,劉琰.  白血病.淋巴瘤. 2014 (08)
[5]ER、PR、HER-2、Ki67在乳腺癌中的表達(dá)及其臨床意義[J]. 李帆,陳穎.  醫(yī)學(xué)綜述. 2014(13)
[6]Ki67、P16、Her-2在乳腺癌中的表達(dá)及其意義和相關(guān)性[J]. 康楠,莫日根.  中國冶金工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志. 2012(05)
[7]乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織Ki-67表達(dá)及其分子分型的意義[J]. 楊歡,陳曉耕,陳新,陳志忠.  中華腫瘤防治雜志. 2012(03)
[8]MAPK信號通路與乳腺癌的研究進(jìn)展[J]. 黃春香.  中醫(yī)學(xué)報. 2010(01)
[9]TNF-α通過JNK和AP-1途徑調(diào)節(jié)乳腺癌MCF-7細(xì)胞VEGF的表達(dá)[J]. 殷詠梅,束永前,陳曉鋒,李薇,劉凌翔,韓曉.  中國腫瘤生物治療雜志. 2009(01)
[10]RNA干擾技術(shù)及其在胃癌基因治療中的應(yīng)用進(jìn)展[J]. 丁鶯,呂賓.  國際消化病雜志. 2008(05)



本文編號：3499935