目的共轉(zhuǎn)orca3/g10h雙基因于長春花毛狀根,提高抗癌生物堿量。方法通過構(gòu)建p CAMBIA1304++orca3+g10h表達載體,利用發(fā)根農(nóng)桿菌介導獲得雙轉(zhuǎn)orca3/g10h基因長春花毛狀根。利用RT-q PCR研究共轉(zhuǎn)orca3/g10h基因長春花毛狀根萜類吲哚生物堿（TIAs）生物合成途徑中相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄差異。采用HPLC研究共轉(zhuǎn)orca3/g10h基因長春花毛狀根TIAs（包括長春堿、長春新堿和阿嗎堿）量。結(jié)果轉(zhuǎn)基因長春花毛狀根中與TIAs生物合成相關(guān)基因asα、ggpps、g10h、str、tdc、cpr、sgd和dat轉(zhuǎn)錄水平均較非轉(zhuǎn)基因長春花普通根高。HPLC結(jié)果表明,轉(zhuǎn)基因長春花毛狀根總TIAs量達到58.23 mg/g,是非轉(zhuǎn)基因長春花普通根的27.5倍。長春堿和長春新堿的平均質(zhì)量分數(shù)均較非轉(zhuǎn)基因普通根高。其中,長春堿平均質(zhì)量分數(shù)最高,為51.30 mg/g,是非轉(zhuǎn)基因普通根的197.3倍。結(jié)論共轉(zhuǎn)orca3/g10h基因能夠有效提高長春花毛狀根中TIAs量。 

【文章來源】：中草藥. 2016,47(18)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 植物表達載體p CAMBIA1304+-orca3-g10h表達載體的構(gòu)建
        1.2.2 發(fā)根農(nóng)桿菌C58C1介導p CAMBIA1304++orca3+g10h轉(zhuǎn)化長春花及陽性克隆檢測
        1.2.3 轉(zhuǎn)基因長春花毛狀根TIAs生物合成相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄差異
        1.2.4 長春花毛狀根TIAs提取
        1.2.5 轉(zhuǎn)基因長春花毛狀根TIAs量的測定
2 結(jié)果與分析
    2.1 植物表達載體p CAMBIA1304+-orca3-g10h的構(gòu)建
    2.2 發(fā)根農(nóng)桿菌介導p CAMBIA1304++orca3+g10h轉(zhuǎn)化長春花PCR檢測
    2.3 共轉(zhuǎn)orca3/g10h長春花毛狀根TIAs生物合成相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄差異
    2.4 HPLC檢測共轉(zhuǎn)orca3/g10h基因長春花毛狀根TIAs量
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]外源鉀水平對長春花生長和生物堿積累的影響[J]. 郭曉瑞,陳琪,段喜華.  植物研究. 2013(06)
[2]植物萜類物質(zhì)生物合成的相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子及其應用前景[J]. 趙恒偉,葛鋒,孫穎,劉迪秋,陳朝銀.  中草藥. 2012(12)
[3]土壤條件對長春花生物堿含量的影響[J]. 何際嬋,董志超,王建榮,晏小霞.  中華中醫(yī)藥學刊. 2012(11)
[4]長春花吲哚萜類生物堿代謝途徑研究進展[J]. 章津,趙淑娟,胡之璧.  藥物生物技術(shù). 2012(03)
[5]長春花萜類吲哚生物堿的分子生物學與代謝工程研究[J]. 盧衍,常凱,鄭月,許宏宣,楊春賢.  安徽農(nóng)業(yè)科學. 2012(16)
[6]長春花毛狀根再生植株的獲得及抗癌生物堿的產(chǎn)生[J]. 龔一富,王何瑜,盧鵬,袁泉,王桂林,劉建軍.  中草藥. 2012(04)
[7]弱光脅迫對大田長春花生物量分配及次生代謝的影響[J]. 佟璐,張寶友,唐中華,郭曉瑞,賈雪瑩,于景華.  植物研究. 2011(02)
[8]鹽脅迫對長春花愈傷組織生長及阿瑪堿積累的影響[J]. 向蓓蓓,朱曄榮,王文娟,王勇.  中草藥. 2011(01)
[9]Engineering Terpenoid Indole Alkaloids Biosynthetic Pathway in Catharanthus roseus Hairy Root Cultures by Overexpressing the Geraniol 10-hydroxylase Gene[J]. 龔一富,廖志華,皮妍,郭賓會,苗志奇,孫小芬,唐克軒.  Journal of Shanghai Jiaotong University. 2005(S1)
[10]長春花抗癌成分長春新堿研究的進展[J]. 盧懿,侯世祥,陳彤.  中國中藥雜志. 2003(11)



本文編號：3499819