以不同軟化階段的軟棗獼猴桃果實(shí)為試材,采用分光光度法測定了多聚半乳糖醛酸酶（Polygalacturonase,PG）、β-半乳糖苷酶（β-galactosidase,β-gal）和果膠甲酯酶（Pectin methylesterase,PME）活性,采用RT-PCR法對其控制基因克隆,并對不同成熟階段的表達(dá)進(jìn)行了分析,以期探討軟棗獼猴桃果實(shí)軟化機(jī)理。結(jié)果表明:軟棗獼猴桃果實(shí)軟化中PME和β-gal在軟化初期出現(xiàn)活性高峰,PG在軟化期形成活性高峰,而且成功克隆得到了軟棗獼猴桃PG和β-gal的基因序列。NCBI Blast結(jié)果表明與中華獼猴桃PG基因和β-gal基因的一致性分別大于95%和90%。PG基因的半定量分析表明PG基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)與PG活性協(xié)同一致,說明在軟棗獼猴桃果實(shí)中PG基因的表達(dá)是轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)控的;而β-gal基因的半定量分析表明β-gal活性波峰結(jié)果一致,但是與果實(shí)軟化過程中β-gal保持較高的酶活性結(jié)果不一致,說明β-gal基因的表達(dá)不僅受到轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控,還可能受到翻譯水平上的調(diào)控。 

【文章來源】：北方園藝. 2020,(15)北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

軟棗獼猴桃果實(shí)軟化過程中PG和

β-gal是起水解果膠支鏈分子半乳聚糖的作用,所以預(yù)測在一部分作物組織軟化中的作用比PG重要[15]。由圖2可知,軟棗獼猴桃果實(shí)軟化過程中保持較高的β-gal活性并在軟化初期出現(xiàn)活性高峰,說明β-gal也是軟棗獼猴桃果實(shí)果膠分解的主要酶。2.3 控制軟棗獼猴桃果實(shí)軟化的主要酶基因克隆及表達(dá)量分析

提取了軟棗獼猴桃總RNA,根據(jù)已報道的其它植物的PG基因序列,設(shè)計了軟棗獼猴桃PG基因的特異引物(Pgu4:atttgttaggggtgtgctct,Pgd4:ttgagggcttaactaaacca),進(jìn)行RT-PCR、克隆得到了其PG的基因序列。NCBI Blast結(jié)果表明與中華獼猴桃PG基因的一致性大于95%,且包含所設(shè)計特異引物序列(圖3中的方框部分),表明了所克隆基因序列的正確性。圖4 軟棗獼猴桃果實(shí)軟化過程中PG基因表達(dá)量變化

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號：3481214