大白菜根腫病是由根腫菌屬根腫菌侵染十字花科植株的根部引起的,該病有著十字花科作物的“癌癥”之稱。因此,挖掘抗病基因,培育抗病品種,對大白菜根腫病研究具有十分重要的意義。本研究在實驗室以大白菜抗病DH系Y635-10和感病DH系Y177-47作為研究親本,構(gòu)建F2分離群體,利用BSA-Seq和RNA-Seq對根腫病抗病基因CRq進行精細定位的基礎上,對CRq進行了克隆,利用Gateway技術構(gòu)建了植物過表達載體,對擬南芥進行遺傳轉(zhuǎn)化,并對轉(zhuǎn)基因植株進行了抗病性鑒定,主要得到以下結(jié)果:1.在河南省農(nóng)科院園藝所新野縣根腫病實驗基地對構(gòu)建的F2分離群體進行春、秋兩季的抗病性鑒定試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)F2分離群體的抗病、感病植株的分離比例約為3:1,根據(jù)孟德爾遺傳定律對抗性鑒定結(jié)果進行分析,判斷大白菜根腫病抗性為一個主效基因控制。2.在F2分離群體表型鑒定的基礎上,依據(jù)抗病、感病的表型的差異,選取極端抗、感表型的個體及親本,構(gòu)建2個測序深度為10x的親本DNA池和2個測序深度為50x的F2分離群體極端抗、感DNA池,進行BSA-Seq分析,將抗性基因初步定位于A03染色體的24.30-24.75區(qū)域(45...

【文章來源】： 鄭州大學河南省 211工程院校

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摘要
Abstract
1. 文章綜述
    1.1 大白菜根腫病概述
        1.1.1 根腫病的起源及危害
        1.1.2 根腫菌的分類及生活史
        1.1.3 根腫菌生理小種的鑒別
        1.1.4 根腫病的防治方法
    1.2 大白菜抗根腫病基因與分子標記的研究進展
        1.2.1 大白菜抗根腫病基因的研究現(xiàn)狀
        1.2.2 分子標記類型及應用
    1.3 BSA-Seq和RNA-Seq的研究及應用
        1.3.1 BSA-Seq的原理及研究進展
        1.3.2 RNA-Seq的研究及應用
    1.4 研究的目的及意義
2. 大白菜抗根腫病候選基因CRq的精細定位
    2.1 材料與方法
        2.1.1 材料和群體構(gòu)建
        2.1.2 抗病性鑒定及病情分級
        2.1.3 基因組DNA提取及抗感池構(gòu)建
        2.1.4 BSA測序分析流程
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 F₂分離群體抗根腫病鑒定
        2.2.2 BSA測序及數(shù)據(jù)質(zhì)控
        2.2.3 比對及注釋分析
        2.2.4 親本未比對上數(shù)據(jù)組裝分析
        2.2.5 SNP-index分析及候選基因潛在區(qū)域確定
        2.2.6 抗根腫病基因CRq的精細定位
    2.3 討論
    2.4 小結(jié)
3. 大白菜抗根腫病候選基因CRq的克隆
    3.1 材料與方法
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 質(zhì)粒及菌種
        3.1.3 試劑及儀器
        3.1.4 培養(yǎng)基及抗生素溶液的配制
        3.1.5 植物組織總RNA和DNA的提取及檢測
        3.1.6 單鏈c DNA的合成
        3.1.7 CRq基因克隆及測序
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 大白菜組織RNA和DNA的提取及檢測
        3.2.2 CRq基因克隆
        3.2.3 抗根腫病基因CRq序列分析
    3.3 討論
    3.4 小結(jié)
4. 大白菜抗根腫病候選基因CRq的植物過表達載體構(gòu)建及擬南芥遺傳轉(zhuǎn)化
    4.1 材料與方法
        4.1.1 植物材料
        4.1.2 總RNA的提取及RT-PCR
        4.1.3 候選基因CRq的克隆及植物過表達載體構(gòu)建
        4.1.4 候選基因CRq的遺傳轉(zhuǎn)化擬南芥
        4.1.5 轉(zhuǎn)CRq基因擬南芥的獲得及抗病性鑒定
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 CRq基因植物過表達載體構(gòu)建
        4.2.2 轉(zhuǎn)基因擬南芥的獲得
        4.2.3 轉(zhuǎn)基因擬南芥的抗病性鑒定
    4.3 討論
    4.4 小結(jié)
5. 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
參考文獻
個人簡歷
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3478321