腺病毒（Ad）介導(dǎo)的基因治療中常被忽視的問題是有效的基因遞送系統(tǒng),目前陽離子脂質(zhì)體和Ad的靜電絡(luò)合是克服這些限制并且能增強(qiáng)基因轉(zhuǎn)導(dǎo)的有效手段,但是這種絡(luò)合會(huì)產(chǎn)生細(xì)胞毒性,同時(shí)對(duì)于Ad不易感染的細(xì)胞,Ad的大使用劑量也會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡,因此限制了該方法的應(yīng)用�；谏鲜霰尘�,我們構(gòu)建了一種新型的腺病毒/聚氨基糖苷復(fù)合載體（Ad-GFP/SS-HPT）,我們對(duì)Ad-GFP/SS-HPT復(fù)合載體開展了以下兩方面的工作:（1）為了探究Ad-GFP/SS-HPT復(fù)合物在細(xì)胞水平上的轉(zhuǎn)染效果和Ad-GFP與SS-HPT的絡(luò)合機(jī)理。我們首先在H9C2細(xì)胞上探究了 SS-HPT的有效的遞送能力和低的細(xì)胞毒性,然后裸Ad-GFP和Ad-GFP/SS-HPT在不同MOI值下轉(zhuǎn)染H9C2的GFP陽性細(xì)胞百分比對(duì)比發(fā)現(xiàn),用裸Ad-GFP轉(zhuǎn)染,在MOI=10、20、40時(shí)的GFP 陽性細(xì)胞百分比分別為5.65%±0.68%、10.23%±1.26%、22.53%±1.03%。但是在SS-HPT存在下,MOI=10、20、40 的 Ad-GFP 轉(zhuǎn)染效率分別提高了 3.8、4.2、3.1 倍（p<0.001）,... 

【文章來源】：北京化工大學(xué)北京市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：89 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－２?ｍｉＲＮＡｓ和ｓｉＲＮＡｓ的作用機(jī)制（Ａ）ｓｉＲＮＡ雙鏈體的反義鏈與相應(yīng)的ｍＲＮＡ分子退火??并觸犮ｍＲＮＡ降解（Ｂ）ｍｉＲＮＡ靶向ｍＲＮＡ的３＇非翻譯區(qū)并抑制蛋白質(zhì)合成１４５１??Ｆｉｇｕｒｅ?１－２?Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ?ｏｆ?ａｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｍｉＲＮＡｓ?ａｎｄ?ｓｉＲＮＡｓ?（Ａ）Ｔｈｅ?ａｎｔｉ－ｓｅｎｓｅ?ｓｔｒａｎｄ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｓｉＲＭＡ??

過在含有ＤＮＡ的情況下使脂質(zhì)膜水合，將高分子量??ＤＮＡ包埋在卵磷脂酰膽堿脂質(zhì)體中［６（）］。陽離子脂質(zhì)與起輔助作用的第二種脂質(zhì)結(jié)合??后，會(huì)使陽離子脂質(zhì)發(fā)揮最大效率，這些輔助脂質(zhì)起到了穩(wěn)定脂質(zhì)體／ＤＮＡ復(fù)合物的??作用或者有助于細(xì)胞內(nèi)膜發(fā)生融合過程，從而有助于ＤＮＡ的逃逸。陽離子脂質(zhì)體也??可用于ｍＲＮＡ遞送［６＇脂質(zhì)體作為遞送載體的優(yōu)勢(shì)是生產(chǎn)成本低且易于構(gòu)建，但是??其低的轉(zhuǎn)染效率、瞬時(shí)表達(dá)和不同程度的細(xì)胞毒性也阻礙其進(jìn)一步的發(fā)展。??＾－－?ＤＮＡ??ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ??圖１－３?ＤＮＡ－脂質(zhì)體復(fù)合物１６２１??Ｆｉｇｕｒｅ?１－３?ＤＮＡ－ｌｉｐｏｓｏｍｅ?ｃｏｍｐｌｅｘ＇６２＇??１．４．１．２陽離子聚合物??由于靜電的相互作用，陽離子聚合物可以結(jié)合ＤＮＡ和ＲＮＡ凝聚成納米顆粒，??這意味著陽離子聚合物可能成為基因遞送載體的潛在應(yīng)用。聚合物ＤＮＡ載體的早期??實(shí)例是聚乙烯亞胺（ＰＥＩ?）、聚（Ｌ－賴氨酸）（ＰＬＬ）和聚酰胺－胺型樹枝狀高分子（ＰＡＭＡＭ?）??［６３－６５］??〇??１９９５年，陽離子聚乙烯亞胺（ＰＥＩ）首次作為基因載體｜６４］，因?yàn)樗鼈兙哂心げ环�(wěn)??定性、高電荷密度（ＤＮＡ凝聚能力）、為ＤＮＡ提供酶降解保護(hù)的能力。目前ＰＥ１?（２??ｋＤａ和２５?ｋＤａ）己經(jīng)成為被廣泛研宄的基因傳遞聚合物，并且這種具有高密度胺的水??溶性聚合物也是最有潛力、最有前途的用于基因傳遞的陽離子聚合物載體｜６４］。ＰＥＩＳ??通過酸催化的氮雜環(huán)丙烷聚合獲得的，生成了一個(gè)具有高陽離子電荷密度勢(shì)的高度支??７??

殼聚糖的轉(zhuǎn)染效率明顯低于??其他陽離子基因載體，如ＰＥＩ、樹枝狀聚合物或陽離子脂質(zhì)。這主要?dú)w因于其在生理??ｐＨ下的最小溶解度和低緩沖能力，導(dǎo)致基因載體的內(nèi)體逃逸不良和復(fù)合核酸的低效??細(xì)胞質(zhì)解偶聯(lián)。??殼聚糖由隨機(jī)分布的Ｐ－（丨－４）鍵合Ｄ－氨基葡萄糖（脫乙�；瘑卧┖停危阴＃模�??氨基葡萄糖（乙酰化單元）組成［６２］。有科學(xué)家試圖提高咪唑乙酸（ＩＡＡ）改性殼聚糖??的轉(zhuǎn)染效率，并將二級(jí)和三級(jí)胺附著在聚合物上，以提高其體內(nèi)緩沖和溶解性［８１］。??ＯＨ??ｎｈ２?ｎ??圖１－５殼聚糖的結(jié)構(gòu)式??Ｆｉｇｕｒｅ?１－５?Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ?ｆｏｒｍｕｌａ?ｏｆ?Ｃｈｉｔｏｓａｎ??１．４．Ｉ．４無機(jī)納米粒子??無機(jī)納米載體一般是指粒徑為１－丨ＯＯｎｍ左右的無機(jī)粒子，它作基因遞送載體不僅??需要達(dá)到低毒、提高遺傳物質(zhì)的穩(wěn)定性、提高轉(zhuǎn)染效率、特定靶向和協(xié)同聯(lián)合診斷、??治療等要求，還需要高的比表面積、可控形貌和尺寸、可控的釋放方式、表面易修飾??等最佳的物理化學(xué)特性。Ｑｉｎｇ等開發(fā)了一種可降解的Ｓｉ０２復(fù)合物（ＤＳ－ＤＯＸ－ＰＧＥＡ），??首先通過一鍋法合成具有自降解特性的新型二硫鍵橋聯(lián)阿霉素（ＤＯＸ）嵌入式的可降??解的Ｓｉ０２納米粒子（ＤＳ－ＤＯＸ），在ＤＳ－ＤＯＸ表明修飾一種功能化的自組裝陽離子??ＰＧＥＡ，在釋放ＤＯＸ的同時(shí)體內(nèi)釋放治療基因Ｐ５３，實(shí)現(xiàn)了基因和藥物的共同遞送１８２］。??９??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]腫瘤壞死因子-α的生物學(xué)功能研究進(jìn)展[J]. 馮馨銳,崔雨舒,何志濤,崔小鵬,王路,潘巧燕,齊玲.  吉林醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報(bào). 2019(01)
[2]血紅細(xì)胞壓積、尿素氮在急性胰腺炎早期病情判斷中的臨床價(jià)值[J]. 李洪玉.  中國現(xiàn)代醫(yī)生. 2017(25)
[3]慢病毒載體及其研究進(jìn)展[J]. 孟凡榮,陳琛,萬海粟,周清華.  中國肺癌雜志. 2014(12)
[4]細(xì)胞組學(xué)技術(shù)在心肌細(xì)胞凋亡研究中的應(yīng)用[J]. 崔巍,李玉琳,王吉靜,張聰聰,吳依娜.  心肺血管病雜志. 2013(06)
[5]腺病毒及紫杉醇陰離子脂質(zhì)體共傳遞復(fù)合物的制備及體外細(xì)胞轉(zhuǎn)染[J]. 曹琳潔,曾琴,孫遜,張正君.  華西藥學(xué)雜志. 2013(01)
[6]心血管疾病檢測(cè)及年輕化趨勢(shì)研究[J]. 康琰.  中國衛(wèi)生產(chǎn)業(yè). 2012(14)
[7]腺病毒-陰離子脂質(zhì)體復(fù)合物的制備和體外表征[J]. 鐘志容,萬瑜,石三軍,張志榮,孫遜.  藥學(xué)學(xué)報(bào). 2012(01)
[8]綠色熒光蛋白GFP的研究進(jìn)展及應(yīng)用[J]. 吳沛橋,巴曉革,胡海,趙靜.  生物醫(yī)學(xué)工程研究. 2009(01)
[9]TNF-α信號(hào)傳導(dǎo)通路的研究現(xiàn)狀[J]. 徐潔,姚紅兵.  瀘州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2007(02)



本文編號(hào)：3478124