腺病毒（Ad）介導(dǎo)的基因治療中常被忽視的問(wèn)題是有效的基因遞送系統(tǒng),目前陽(yáng)離子脂質(zhì)體和Ad的靜電絡(luò)合是克服這些限制并且能增強(qiáng)基因轉(zhuǎn)導(dǎo)的有效手段,但是這種絡(luò)合會(huì)產(chǎn)生細(xì)胞毒性,同時(shí)對(duì)于Ad不易感染的細(xì)胞,Ad的大使用劑量也會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡,因此限制了該方法的應(yīng)用�；谏鲜霰尘�,我們構(gòu)建了一種新型的腺病毒/聚氨基糖苷復(fù)合載體（Ad-GFP/SS-HPT）,我們對(duì)Ad-GFP/SS-HPT復(fù)合載體開(kāi)展了以下兩方面的工作:（1）為了探究Ad-GFP/SS-HPT復(fù)合物在細(xì)胞水平上的轉(zhuǎn)染效果和Ad-GFP與SS-HPT的絡(luò)合機(jī)理。我們首先在H9C2細(xì)胞上探究了 SS-HPT的有效的遞送能力和低的細(xì)胞毒性,然后裸Ad-GFP和Ad-GFP/SS-HPT在不同MOI值下轉(zhuǎn)染H9C2的GFP陽(yáng)性細(xì)胞百分比對(duì)比發(fā)現(xiàn),用裸Ad-GFP轉(zhuǎn)染,在MOI=10、20、40時(shí)的GFP 陽(yáng)性細(xì)胞百分比分別為5.65%±0.68%、10.23%±1.26%、22.53%±1.03%。但是在SS-HPT存在下,MOI=10、20、40 的 Ad-GFP 轉(zhuǎn)染效率分別提高了 3.8、4.2、3.1 倍（p<0.001）,... 

【文章來(lái)源】：北京化工大學(xué)北京市 211工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－２?ｍｉＲＮＡｓ和ｓｉＲＮＡｓ的作用機(jī)制（Ａ）ｓｉＲＮＡ雙鏈體的反義鏈與相應(yīng)的ｍＲＮＡ分子退火??并觸犮ｍＲＮＡ降解（Ｂ）ｍｉＲＮＡ靶向ｍＲＮＡ的３＇非翻譯區(qū)并抑制蛋白質(zhì)合成１４５１??Ｆｉｇｕｒｅ?１－２?Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ?ｏｆ?ａｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｍｉＲＮＡｓ?ａｎｄ?ｓｉＲＮＡｓ?（Ａ）Ｔｈｅ?ａｎｔｉ－ｓｅｎｓｅ?ｓｔｒａｎｄ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｓｉＲＭＡ??

過(guò)在含有ＤＮＡ的情況下使脂質(zhì)膜水合，將高分子量??ＤＮＡ包埋在卵磷脂酰膽堿脂質(zhì)體中［６（）］。陽(yáng)離子脂質(zhì)與起輔助作用的第二種脂質(zhì)結(jié)合??后，會(huì)使陽(yáng)離子脂質(zhì)發(fā)揮最大效率，這些輔助脂質(zhì)起到了穩(wěn)定脂質(zhì)體／ＤＮＡ復(fù)合物的??作用或者有助于細(xì)胞內(nèi)膜發(fā)生融合過(guò)程，從而有助于ＤＮＡ的逃逸。陽(yáng)離子脂質(zhì)體也??可用于ｍＲＮＡ遞送［６＇脂質(zhì)體作為遞送載體的優(yōu)勢(shì)是生產(chǎn)成本低且易于構(gòu)建，但是??其低的轉(zhuǎn)染效率、瞬時(shí)表達(dá)和不同程度的細(xì)胞毒性也阻礙其進(jìn)一步的發(fā)展。??＾－－?ＤＮＡ??ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ??圖１－３?ＤＮＡ－脂質(zhì)體復(fù)合物１６２１??Ｆｉｇｕｒｅ?１－３?ＤＮＡ－ｌｉｐｏｓｏｍｅ?ｃｏｍｐｌｅｘ＇６２＇??１．４．１．２陽(yáng)離子聚合物??由于靜電的相互作用，陽(yáng)離子聚合物可以結(jié)合ＤＮＡ和ＲＮＡ凝聚成納米顆粒，??這意味著陽(yáng)離子聚合物可能成為基因遞送載體的潛在應(yīng)用。聚合物ＤＮＡ載體的早期??實(shí)例是聚乙烯亞胺（ＰＥＩ?）、聚（Ｌ－賴(lài)氨酸）（ＰＬＬ）和聚酰胺－胺型樹(shù)枝狀高分子（ＰＡＭＡＭ?）??［６３－６５］??〇??１９９５年，陽(yáng)離子聚乙烯亞胺（ＰＥＩ）首次作為基因載體｜６４］，因?yàn)樗鼈兙哂心げ环�(wěn)??定性、高電荷密度（ＤＮＡ凝聚能力）、為ＤＮＡ提供酶降解保護(hù)的能力。目前ＰＥ１?（２??ｋＤａ和２５?ｋＤａ）己經(jīng)成為被廣泛研宄的基因傳遞聚合物，并且這種具有高密度胺的水??溶性聚合物也是最有潛力、最有前途的用于基因傳遞的陽(yáng)離子聚合物載體｜６４］。ＰＥＩＳ??通過(guò)酸催化的氮雜環(huán)丙烷聚合獲得的，生成了一個(gè)具有高陽(yáng)離子電荷密度勢(shì)的高度支??７??

殼聚糖的轉(zhuǎn)染效率明顯低于??其他陽(yáng)離子基因載體，如ＰＥＩ、樹(shù)枝狀聚合物或陽(yáng)離子脂質(zhì)。這主要?dú)w因于其在生理??ｐＨ下的最小溶解度和低緩沖能力，導(dǎo)致基因載體的內(nèi)體逃逸不良和復(fù)合核酸的低效??細(xì)胞質(zhì)解偶聯(lián)。??殼聚糖由隨機(jī)分布的Ｐ－（丨－４）鍵合Ｄ－氨基葡萄糖（脫乙�；瘑卧┖停危阴＃模�??氨基葡萄糖（乙�；瘑卧┙M成［６２］。有科學(xué)家試圖提高咪唑乙酸（ＩＡＡ）改性殼聚糖??的轉(zhuǎn)染效率，并將二級(jí)和三級(jí)胺附著在聚合物上，以提高其體內(nèi)緩沖和溶解性［８１］。??ＯＨ??ｎｈ２?ｎ??圖１－５殼聚糖的結(jié)構(gòu)式??Ｆｉｇｕｒｅ?１－５?Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ?ｆｏｒｍｕｌａ?ｏｆ?Ｃｈｉｔｏｓａｎ??１．４．Ｉ．４無(wú)機(jī)納米粒子??無(wú)機(jī)納米載體一般是指粒徑為１－丨ＯＯｎｍ左右的無(wú)機(jī)粒子，它作基因遞送載體不僅??需要達(dá)到低毒、提高遺傳物質(zhì)的穩(wěn)定性、提高轉(zhuǎn)染效率、特定靶向和協(xié)同聯(lián)合診斷、??治療等要求，還需要高的比表面積、可控形貌和尺寸、可控的釋放方式、表面易修飾??等最佳的物理化學(xué)特性。Ｑｉｎｇ等開(kāi)發(fā)了一種可降解的Ｓｉ０２復(fù)合物（ＤＳ－ＤＯＸ－ＰＧＥＡ），??首先通過(guò)一鍋法合成具有自降解特性的新型二硫鍵橋聯(lián)阿霉素（ＤＯＸ）嵌入式的可降??解的Ｓｉ０２納米粒子（ＤＳ－ＤＯＸ），在ＤＳ－ＤＯＸ表明修飾一種功能化的自組裝陽(yáng)離子??ＰＧＥＡ，在釋放ＤＯＸ的同時(shí)體內(nèi)釋放治療基因Ｐ５３，實(shí)現(xiàn)了基因和藥物的共同遞送１８２］。??９??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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