研究構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)Plekhs1 shRNA 2型重組腺相關(guān)病毒載體（rAAV2-GFP-shRNA-Plekhs1）,篩選并制備抑制Plekhs1表達(dá)效果最強(qiáng)重組腺相關(guān)病毒（rAAV2-PL3）。重組病毒子宮角注射到小鼠子宮,通過(guò)Real-time PCR、熒光檢測(cè)、免疫組化技術(shù)檢測(cè)rAAV2-PL3在小鼠子宮侵染表達(dá)規(guī)律,分析rAAV2-PL3侵染小鼠子宮抑制Plekhs1表達(dá)效果及對(duì)生殖影響。結(jié)果表明,rAAV2-PL3可有效轉(zhuǎn)染至小鼠子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞中并抑制Plekhs1表達(dá),F1代產(chǎn)仔數(shù)量顯著降低。研究表明,子宮角注射重組腺相關(guān)病毒可高效研究子宮腔上皮基因功能。 

【文章來(lái)源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2020,51(06)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

rAAV2載體構(gòu)建及病毒包裝

rAAV2侵染小鼠子宮內(nèi)膜上皮原代細(xì)胞，48 h后熒光顯微鏡觀察細(xì)胞侵染率達(dá)100%（見(jiàn)圖2A、B），結(jié)果表明2型腺相關(guān)病毒可有效侵染小鼠子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞；Real-time PCR檢測(cè)各組rAAV2沉默Plekhs1基因表達(dá)效果，每組cDNA樣品3組平行樣，其中rAAV2-PL3沉默效果顯著（見(jiàn)圖2C），制備高濃度rAAV2-PL3用于在體注射試驗(yàn)。2.3探究rAAV2-PL3注射小鼠子宮表達(dá)規(guī)律

小鼠子宮角注射rAAV2-PL3 2周后，與正常雄鼠交配，隔天早上檢查陰道栓，見(jiàn)栓21 d后統(tǒng)計(jì)小鼠出生情況。由表2可知，注射rAAV2-PL3試驗(yàn)組小鼠產(chǎn)仔數(shù)分別為3、6、6、7、5只；注射rAAV2-SCR對(duì)照組小鼠產(chǎn)仔數(shù)分別為12、11、12、10、11只；可見(jiàn)試驗(yàn)組比對(duì)照組產(chǎn)仔數(shù)減少，說(shuō)明干擾Plekhs1對(duì)生殖有較大影響。F1代小鼠生育情況統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，注射rAAV2-PL3小鼠產(chǎn)仔數(shù)明顯減少（P<0.05）（見(jiàn)圖5）。圖4 rAAV2-PL3沉默子宮上皮Plekhs1表達(dá)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]小鼠心肌層注射方法的改進(jìn)[J]. 王惠,趙蓉,周學(xué)中.  上海大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2017(06)
[2]豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白在桿狀病毒系統(tǒng)表達(dá)及鑒定[J]. 宋月,姜艷萍,崔文,李一經(jīng).  東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2012(03)
[3]小鼠輸卵管、子宮和卵巢中EGF-R mRNA表達(dá)的研究[J]. 張黎霞,嚴(yán)云勤,曹允考,譚景和.  東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2000(02)

碩士論文
[1]Plekhs1在小鼠子宮接受態(tài)轉(zhuǎn)變過(guò)程中的表達(dá)與調(diào)節(jié)[D]. 馬珍子.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015



本文編號(hào)：3477094