基因治療是指將外源性基因傳遞進(jìn)病變細(xì)胞從而達(dá)到治療效果的一種基因水平的治療方法,它為克服難治愈性疾病帶來了新的希望�；蛑委煹年P(guān)鍵在于如何安全有效地將外源基因傳遞進(jìn)靶細(xì)胞中。傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)染方法大多是依賴于溶液介導(dǎo)的基因傳遞途徑,基因通過胞吞作用進(jìn)入細(xì)胞的效率較低且易被降解,這極大地限制了轉(zhuǎn)染的效率。基于材料表面介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方法具有原位定域性和長效穩(wěn)定性等特點(diǎn),為有效解決基因傳遞效率低下的問題提供了可行的策略。在眾多的生物材料中,硅納米線陣列（SiNWAs,SN）由于其良好的生物相容性而受到了關(guān)注,研究發(fā)現(xiàn)適當(dāng)長度的SN能夠刺穿細(xì)胞膜而不影響細(xì)胞的活性。利用SN的這一特性可以將外源生物分子如多肽、DNA和RNA等傳遞進(jìn)細(xì)胞發(fā)揮其作用。但SN表面存在氧化層,無法有效負(fù)載DNA。為了提高硅納米線陣列的轉(zhuǎn)染效率我們對SN表面進(jìn)行了化學(xué)修飾,并輔之以提高DNA負(fù)載量和促進(jìn)基因表達(dá)的手段,具體研究如下:1.我們在硅納米線陣列表面接枝了具有優(yōu)良生物相容性的6-O-磺化殼聚糖,同時結(jié)合能與DNA相互作用形成納米復(fù)合物的Ca2+來提高DNA的負(fù)載效率從而提高體系的轉(zhuǎn)染效率。在這一轉(zhuǎn)染體系中,我們充分利用SN穿... 

【文章來源】：蘇州大學(xué)江蘇省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：112 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－３非病毒型基因載體轉(zhuǎn)染機(jī)理ｎ７］

ｏｏＱＯｘｘｘｘｘ＾＾＾Ｊｌ＾＾＾ｏｏｏａｘｘ＾ＪＱｏｏｏｏｏｏｏｏ??Ｃａ２＋?Ｃａ２＜２＾?〇?Ｃａ２＋??ｃａ－?ｃａ２＋??ｏｏｏｏｏｏｏｏｏｏｏｏｏｏｏｏａ＾＾＾＾＾＾＾Ｂ＾－＾＾３０００００００００００００００００００??Ｃａ２＋??Ｂ?“??ｏｏｏｏｏｏｏｏｏｆ?Ｔ?］ＸＸＸＸＸ）Ｃ＾３＾＾＾＾＾＾＾｜Ｂ＾Ｘ＞〇〇ＯＯＯｃ／?］〇〇〇〇〇〇〇〇??ｏｏｏｏｏｏｏｏｏｏｏｏｏｏｏｏ〇〇ｃ＾＾＾＿＾＾ｊ＾＾Ｊ＾＾＿＿＾＾＾ｏｏ〇ｏ〇〇〇〇〇ｏｏｏｏｏｏｏｏｏｏ??圖１－４鈣離子調(diào)控的核孔復(fù)合物示意圖（Ａ：?Ｃａ２＋存在條件下；Ｂ：?Ｃａ２＋從核池??中釋放出去后）［２７］。??盡管磷酸鈣轉(zhuǎn)染體系有著上述種種優(yōu)點(diǎn)，但該體系的轉(zhuǎn)染效率難以達(dá)到一致，??溫度、ｐＨ值以及溶液中的離子濃度等因素都會對形成的復(fù)合粒子的粒徑產(chǎn)生重??要影響。同時在磷酸鈣顆粒的形成過程中，納米粒子將大量聚集導(dǎo)致粒子難以進(jìn)??入細(xì)胞，降低了轉(zhuǎn)染效率。為了解決這一問題，提高磷酸鈣轉(zhuǎn)染的效率和穩(wěn)定性，??許多研究者通過調(diào)整磷酸鈣粒子的制備方法或是添加助劑來控制形成的磷酸鈣??粒子的粒徑。如在磷酸鈣轉(zhuǎn)染體系中加入適量濃度的Ｍｇ２＇?Ｃｕ２＋、Ｍｎ２＋等二價??４??

…?（Ｌ－ＰＥＩ）??—?ｈ２ｎ＇ｎＺ?＇ｎｖ＾ｈ２－－－??＾?）?：??ｎｈ２?Ａ??？?丨?．．?ｈ２ｎ?ｍｎ?３￣ｋ，ｈ??ｐｏｌｙ（ｐｒｏｐｙｌｅｎｉｍｉｎｅ）?Ｓ?ｏｆＨ?？Ｈ＾＊?？??（ｐｐ｜）??…ｉ。ＨＮ？Ｎｖ??Ｈ?Ｃ?ｉ〇??Ｈ?９?Ｈ＼??十?４?。、＇Ｎ?？ｗ??…１ＨｆＡ??Ｓ?６?ｓ?％??ＮＨ２?Ｙ?：??ｐｏｌｙ（ｌｙｓｉｎｅ）?ｐｏｌｙ（ａｍｉｄｏａｍｉｎｅ）??（ＰＬＬ）?（ＰＡＭＡＭ）??圖１－５常用的陽離子聚合物［３１］。??１．２．２．１聚乙烯亞胺（ＰＥＩ）??作為最常用的陽離子聚合物，聚乙烯二胺（ＰＥＩ）聚合物鏈上含有大量的氨??基，因此具有較高的電荷密度，容易和帶負(fù)電荷的基因作用形成復(fù)合物。同時，??ＰＥＩ具有所謂的“質(zhì)子海綿效應(yīng)”，能夠保護(hù)目標(biāo)ＤＮＡ從內(nèi)涵體／溶酶體中逃逸??出來，這是因?yàn)椋校牛杀旧砗写罅康陌被谶M(jìn)入細(xì)胞溶酶體后能夠迅速被質(zhì)子??６??


本文編號：3475415