發(fā)布時間：2021-11-03 05:33

　　體細(xì)胞核移植技術(shù)（Somatic cell nuclear transfer,SCNT）在創(chuàng)制基因修飾動物方面已展現(xiàn)出巨大的應(yīng)用價值,是一種在家畜抗病育種材料創(chuàng)制、疾病模型構(gòu)建和基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究等方面具有廣闊應(yīng)用前景的技術(shù)。以轉(zhuǎn)基因克隆動物的體細(xì)胞為核供體進(jìn)行SCNT,開展再克隆以獲得更多轉(zhuǎn)基因動物已被證明是可行的。然而目前關(guān)于轉(zhuǎn)基因豬再克隆的研究有限且再克隆效率也不理想。研究表明,利用組蛋白去乙�；种苿㏒criptaid處理非轉(zhuǎn)基因供體細(xì)胞或SCNT重構(gòu)胚胎可改善克隆胚胎發(fā)育。本實驗室前期創(chuàng)建了抗豬傳染性胃腸炎的APN基因編輯克隆豬。為建立并優(yōu)化APN基因編輯克隆豬體細(xì)胞制備和再克隆胚胎生產(chǎn)方案,為今后實現(xiàn)APN基因編輯豬擴(kuò)群提供技術(shù)參考,本研究首先從APN基因編輯豬耳部皮膚組織內(nèi)分離建立了皮膚成纖維細(xì)胞系證明了其再克隆的可能性,接著利用Scriptaid處理體細(xì)胞或再克隆胚胎,探明了Scriptaid對體細(xì)胞體外生長和再克隆胚胎早期發(fā)育的影響,具體結(jié)果如下:（1）APN豬皮膚成纖維細(xì)胞建系及再克隆嘗試。通過體外培養(yǎng)成功獲得APN豬的皮膚成纖維細(xì)胞系,該細(xì)胞具有一般成纖維細(xì)胞的生物學(xué)特... 

【文章來源】：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－２細(xì)胞遷出后繼續(xù)培養(yǎng)４ｄ?（４〇ｘ和１０００??．－＾＜ｘ

２結(jié)果??２．１?ＡＰＮ基因編輯豬的耳緣成纖維細(xì)胞鑒定??原代培養(yǎng)第６?ｄ，在顯微鏡下觀察到有細(xì)胞遷出。鏡下可觀察到細(xì)胞立體、飽滿，??呈紡錘形，邊緣光滑，成片分布（如圖２－１）。??鬌??ＨＩＩＨＨＲＩｒ??２００?Ｍｍ??圖２－丨細(xì)胞從組織塊遷出（４〇ｘ和ｌ〇〇ｘ）??Ｆｉｇ．２－１?Ｃｅｌｌｓ?ｍｉｇｒａｔｅｄ?ｆｒｏｍ?ｔｉｓｓｕｅ?ｂｌｏｃｋｓ?（４０＾?ａｎｄ?１０〇ｘ）??繼續(xù)培養(yǎng)一段時間后，在倒置顯微鏡下觀察到，獲得的細(xì)胞形態(tài)規(guī)整，分布均勻，??細(xì)胞呈紡錘形，貼壁生長，從形態(tài)上看符合典型成纖維細(xì)胞的基本特征（如圖２－２）。??５（Ｈ｝ｉｉｍ?２００?ｐｍ??圖２－２細(xì)胞遷出后繼續(xù)培養(yǎng)４ｄ?（４〇ｘ和１０００??Ｆｉｇ．２－２?Ｃｅｌｌｓ?ｃｏｎｔｉｎｕｅ?ｔｏ?ｃｕｌｔｕｒｅ?ｆｏｒ?４?ｄａｙｓ?ａｆｔｅｒ?ｍｉｇｒａｔｅｄ?ｆｒｏｍ?ｔｉｓｓｕｅ?ｂｌｏｃｋｓ（４０＾＜?ａｎｄ?１０〇ｘ）??細(xì)胞經(jīng)凍存后復(fù)蘇，依然可以保持較高的存活率，復(fù)蘇后的細(xì)胞依然有著旺盛的??生命力。且復(fù)蘇后細(xì)胞的生長狀態(tài)與凍存前無明顯差別（如圖２－３）。??２７??

■■■■??Ｉ卜Ｊ??圖２－３經(jīng)凍存后復(fù)蘇的細(xì)胞（４０＞？和ＩＯＯｘ）??Ｆｉｇ．２－３?Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ?ｃｅｌｌｓ?ａｆｔｅｒ?ｔｈａｗｉｎｇ?（４〇ｘ?ａｎｄ?１００＾）??解凍后與同期解凍的普通長白幼豬耳成纖維細(xì)胞同時培養(yǎng)，通過ＭＴＴ法繪制二??者生長曲線，發(fā)現(xiàn)兩者之間生長趨勢均呈典型“Ｓ”型，符合一般成纖維細(xì)胞的生長規(guī)??律（如圖２－４ｈ??０．４－１??＋?ａｐｎ基因編輯豬??＋普通＾白幼豬??Ｑ?０－２－??。１＇??ＰＢＳ?Ｄ１?Ｄ２?Ｄ３?Ｄ４?Ｄ５?Ｄ６?Ｄ７?Ｄ８??圖２－４不同來源的豬耳緣成纖維細(xì)胞的生長曲線??Ｆｉｇ．２－４?Ｔｈｅ?ｇｒｏｗｔｈ?ｃｕｒｖｅ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｐｉｇ?ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ??２．２?Ｓｃｒｉｐｔａｉｄ對ＡＰＮ豬耳緣成纖維細(xì)胞的影響??在顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)未經(jīng)ＳｃＨｐｔａｉｄ處理的細(xì)胞能夠正常、穩(wěn)定地貼壁生長，細(xì)胞??呈現(xiàn)出紡錘形，梭形，細(xì)胞形態(tài)、大小均一，在皿底呈放射狀均勻分布。??而經(jīng)處理后的細(xì)胞，Ｓｃｒｉｐｔａｉｄ濃度越高，處理時間越長，其形態(tài)變化越明顯。細(xì)??胞呈現(xiàn)出猶如高代次細(xì)胞般的形態(tài)，細(xì)胞之間接觸不緊密，細(xì)胞形狀不規(guī)則，細(xì)胞邊??緣塌陷，細(xì)胞核凸起，經(jīng)處理后的細(xì)胞，細(xì)胞增殖速度變慢且逐漸出現(xiàn)死亡現(xiàn)象。通??２８??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]新生豬肌組織成纖維細(xì)胞系和耳部皮膚成纖維細(xì)胞系的建立[D]. 邢蕾.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007



本文編號：3473151