發(fā)布時間：2021-11-03 03:47

　　背景感染是導(dǎo)致新生兒死亡的重要原因,住院患兒因免疫系統(tǒng)不成熟、使用廣譜抗生素、接受侵入性外科操作等因素影響,容易發(fā)生醫(yī)院獲得性感染,尤其在新生兒重癥監(jiān)護病房（Neonatal Intensive Care Unit,NICU）內(nèi),醫(yī)院獲得性感染與患兒的發(fā)病率和死亡率顯著相關(guān)。本實驗室長期對我院就診患者進行發(fā)熱呼吸道癥候群、發(fā)熱出疹癥候群和腹瀉癥候群病原譜的監(jiān)測,其中80%為兒童,包括新生兒。在監(jiān)測工作中發(fā)現(xiàn),2019年5～7月集中檢出來自我院NICU 7例�？刹《�11型（echovirus 11,EchoV 11）陽性樣本。EchoV 11屬于B組腸道病毒,多數(shù)致死性腸道病毒感染由EchoV 11所致。1977年至今,國外已報道多起新生兒病房內(nèi)EchoV 11的暴發(fā),死亡率高;國內(nèi)目前多為散發(fā)病例,近年也開始出現(xiàn)新生兒院內(nèi)感染的隱患,但尚未引起廣泛關(guān)注。目前臨床常用的EchoV 11檢測方法是利用多聚酶鏈式反應(yīng)（polymerase chain reaction,PCR）擴增VP1區(qū)序列后進行測序鑒定,該方法檢測周期較長（約2～3天）,國內(nèi)外目前還未有針對EchoV 11的快速分子檢測... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：84 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１?－２?ＥｃｈｏＶ?１１感染患兒住院時間段??Ｆｉｇ．?１－２?Ｄｕｒａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｈｏｓｐｉｔａｌｉｚａｔｉｏｎ?ｆｏｒ?ｃｈｉｌｄｒｅｎ?ｗｉｔｈ?ＥｃｈｏＶ?１１?ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ??

雙峰，陰??性對照孔在７８°Ｃ左右出現(xiàn)非特異性峰值，故引物濃度為ｌ．Ｏ＾Ｍ時ＰＣＲ反應(yīng)特異性??欠佳，不應(yīng)設(shè)置為最佳反應(yīng)濃度。??針對陽性樣本３個復(fù)孔擴增曲線的重復(fù)性，在０．２？０．８＾Ｍ引物濃度中，濃度為??０．４ｐＭ吋重復(fù)性最好；針對擴增曲線的熒光強度，在０．２？０仰Ｍ引物濃度中，濃??度為０．２ｐＭ或０．６ｐＭ吋熒光強度最高；針對擴增曲線的Ｃｔ值，弓丨物濃度為０．２＿??時Ｃｔ值在２０左右，引物濃度為０．４？０．８ｐＭ時Ｃｔ值均為１８左右。不同引物濃度的熔??解曲線綜合展示見圖２－３。??Ｍｅｌｔ?Ｃｕｒｖｅ?Ｐｌｏｔ??。５?２??ｒ：：??ｉ?－?／１??ｉ?／?１??＼＿＿＿??０５?〇?７０?０?７５?〇?８０?０?８Ｓ?０?ＭＯ?０９?０??Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ?（＾Ｃ）??圖２－３引物濃度０．２－１你Ｍ?ＰＣＲ反應(yīng)熔解曲線??Ｆｉｇｕｒｅ?２－３?ＰＣＲ?Ｍｅｌｔ?ｃｕｒｖｅ?ｐｌｏｔ?ｗｉｔｈ?ｐｒｉｍｅｒ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?ｏｆ?０．２－１．０?｜ｉＭ??４７??

?第二章ＥｃｈｏＶ?１１熒光定量ＰＣＲ檢測方法的建立???ｃｏｐｉｅｓ／｜ｉｌ、１０?ｃｏｐｉｅｓ／（ｉｌ＞?１０２?ｃｏｐｉｅｓ／（ｉｌ、１０３?ｃｏｐｉｅｓ／｜ｉＫ?１０４?ｃｏｐｉｅｓ／｜ｉｌ、１０５?ｃｏｐｉｅｓ／｜ｉＫ??１０６?ｃｏｐｉｅｓ／ｊｘｌ、１０７?ｃｏｐｉｅｓ／（ｉｌ、１０８?ｃｏｐｉｅｓ／ｊｘｌ、１０９?ｃｏｐｉｅｓ／ｐｌ系列濃度的標準品。??圖２－６?ＥｃｈｏＶ?１１?ＶＰ１完整區(qū)域擴增產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳圖??Ｆｉｇｕｒｅ?２－６?Ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｏｆ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?ＥｃｈｏＶ?１１?ＶＰ１?ｃｏｍｐｌｅｔｅ??ｓｅｑｕｅｎｃｅ??注：電泳條帶從左至右依次為Ｍ?（ＤＮＡＭａｋｅｒＢ５００３５１：?１００？５０００ｂｐ）；?１、２?（９５１２８病毒液??擴增產(chǎn)物），擴增產(chǎn)物片段長約１４００ｂｐ。??圖２－７?ＴＡ克隆插入片段擴增產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳圖??Ｆｉｇｕｒｅ?２－７?Ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｏｆ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?ＴＡ?ｃｌｏｎｅ?ｉｎｓｅｒｔ?ｓｅｑｕｅｎｃｅ??注：電泳條帶從左至右依次為Ｍ?（ＤＮＡＭａｋｅｒＢ５００３５１：?１００？５０００ｂｐ）；?１?（ＴＡ克隆插入片??段擴增產(chǎn)物），擴增產(chǎn)物片段長約ＭＯＯｂｐ。??５２??


本文編號：3472982