植物谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶（GSTs）在正常生長條件下的細胞代謝以及由于重金屬脅迫所帶來的解毒過程中,都發(fā)揮著重要作用。為了進一步研究BvGST基因在能源甜菜鎘逆境脅迫中的功能,本研究利用RT-PCR的方法,從能源甜菜體內(nèi)克隆獲得了Beta vulgaris glutathione S-transferase（BvGST,LOC104898671）基因。利用酵母表達載體構(gòu)建pYES2-BvGST重組質(zhì)粒,并轉(zhuǎn)化到酵母InVSc1中。SqRT-PCR結(jié)果表明,與內(nèi)參基因ACT1相比,BvGST基因可以受到半乳糖的誘導從而適量表達。當施加0.5 mmol/L CdCl2逆境脅迫后,適量表達BvGST重組菌的生長狀態(tài)和趨勢要明顯優(yōu)于對照菌株（轉(zhuǎn)化pYES2的酵母）,并具有相對更高的Cd耐受性。因此可以推斷,能源甜菜BvGST基因在鎘逆境脅迫過程中發(fā)揮著重要的作用,并有可能通過GST介導的氧化逆境的活性解毒,從而參與到細胞對重金屬鎘離子的代謝平衡調(diào)控過程中。 

【文章來源】：中國糖料. 2020,42(04)

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

能源甜菜BvGST基因的克隆

提取酵母pYES2質(zhì)粒，利用限制性內(nèi)切酶BamHI和Xho I將pYES2質(zhì)粒和pEASY-T1-BvGST質(zhì)粒進行酶切，得到帶有特異性連接的粘性末端的載體和目的片段（圖2-A）。膠回收目的條帶，通過T4連接酶過夜連接以及大腸桿菌轉(zhuǎn)化，所獲得的的Amp抗性克隆的質(zhì)粒DNA經(jīng)過BamHI以及Xho I的雙酶切鑒定，分別在5.9 kb和642 bp左右的位置獲得了相應(yīng)的目的條帶，從而獲得正確的酵母重組質(zhì)粒pYES2-BvGST（圖2-B）。將陽性克隆轉(zhuǎn)入酵母InVSc1中以進行下一步的檢測及功能分析。2.3 BvGST基因在酵母體內(nèi)的表達

為了進一步檢測重組質(zhì)粒pYES2-BvGST在酵母InVSc1中的表達情況，實驗將重組菌培養(yǎng)于誘導型培養(yǎng)基YPGDR中，適量誘導表達目的基因BvGST，以酵母ACT1基因作為內(nèi)參基因。Semi-quantitative PCR研究表明，經(jīng)過半乳糖的誘導，隨著培養(yǎng)時間的增加，與酵母ACT1基因的表達幾乎沒有變化相比，BvGST基因的表達量卻在逐漸增加（圖3），從而實驗進一步證實了甜菜BvGST基因在重組酵母菌體內(nèi)可以被誘導并正確地表達。2.4 鎘脅迫下甜菜BvGST基因在酵母體內(nèi)的功能分析

【參考文獻】：
期刊論文
[1]鎘逆境脅迫下甜菜BvHIPP24基因在大腸桿菌的功能分析[J]. 魯振強,王錦霞,董大鵬,張司揚,劉大麗.  中國糖料. 2019(04)
[2]甜菜BvMTP11基因的克隆及序列分析[J]. 王錦霞,李碩,代春艷,馬龍彪,劉大麗.  中國糖料. 2019(03)



本文編號：3469046