神農(nóng)香菊（Chrysanthemum indicum var.aroma）ticum是菊科（Compositae）菊屬（Chrysanthemum）的多年生草本植物,植株香氣濃郁,分泌物主要化學(xué)成分為龍腦、α-側(cè)柏酮、β-側(cè)柏酮等萜類(lèi)化合物,是一種珍貴的香料植物。DXR基因是萜類(lèi)物質(zhì)合成MEP途徑的一個(gè)關(guān)鍵的限速酶,對(duì)下游MEP的合成具有重要影響。為探究并完善神農(nóng)香菊萜類(lèi)物質(zhì)合成通路關(guān)鍵酶基因的表達(dá)方式,本研究以神農(nóng)香菊為實(shí)驗(yàn)材料,預(yù)測(cè)并分析了其萜類(lèi)物質(zhì)合成通路的關(guān)鍵酶基因,克隆并分析了神農(nóng)香菊萜類(lèi)合酶（CiDXR）基因及其啟動(dòng)子。研究結(jié)果如下:在經(jīng)過(guò)茉莉酸甲酯處理后的神農(nóng)香菊轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中,共篩選到21個(gè)上調(diào)表達(dá)的萜類(lèi)物質(zhì)合成通路基因,未發(fā)現(xiàn)下調(diào)表達(dá)的基因。GO生物學(xué)過(guò)程注釋到的主要集中在氧化還原過(guò)程、代謝過(guò)程、裂解酶、解旋酶和萜烯合酶活性生物過(guò)程中。在經(jīng)過(guò)UV-B紫外光處理后的神農(nóng)香菊轉(zhuǎn)錄組中,共發(fā)現(xiàn)68個(gè)差異表達(dá)基因,上調(diào)表達(dá)的片段共有36個(gè),下調(diào)表達(dá)的基因片段有32個(gè)。GO生物過(guò)程注釋主要集中在氧化還原過(guò)程、代謝過(guò)程和催化活性中。有6個(gè)基因被注釋到萜類(lèi)合酶活性過(guò)程。從神農(nóng)香菊葉片... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－２?ＧＯ生物過(guò)程注釋富集分析??Ｆｉｇ．２－２?Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ＧＯ?ｂｉｏｌｏｇｉｃ?ｐｒｏｃｅｓｓ?ａｎｎｏｔａｔｉｏｎ??

?２基于轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的神農(nóng)香菊萜類(lèi)物質(zhì)合酶分析???Ｃ?１９５８８．８０２６９?－１．８３?１？１６?Ｓ?葉綠體?Ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓ?ｒＲＮＡ修飾，氧化還原過(guò)程，代謝??ａｎｎｕｕｓ?過(guò)程，ｒＲＮＡ加工，甲基化，ＲＮＡ??加工，氧化還原酶活性，ｒＲＮＡ甲??基轉(zhuǎn)移酶活性，甲基轉(zhuǎn)移酶活性，??０－甲基轉(zhuǎn)移酶活性??Ｃ１９５８８．５１２５２?－３．００?１３９２?否?胞外基質(zhì)?Ｓｏｌａｎｕｍ?異戊二烯轉(zhuǎn)移酶活性??ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ??Ｃ１９５８８．８６２５２?－１．４５?１４３３?是?葉綠體?Ｈｅｌｉａｎｔｆｍｓ?甲基化，甲基轉(zhuǎn)移酶活性??ａｎｎｕｕｓ??基５０「??？??敘?ｍｍ??Ｉ?ｉ??１＂?Ｊ?「；??丨丨■?■?＿「……ｒ，??圖２－４?ＧＯ生物過(guò)程注釋富集分析??Ｆｉｇ．２－４?Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ＧＯ?ｂｉｏｌｏｇｉｃ?ｐｒｏｃｅｓｓ?ａｎｎｏｔａｔｉｏｎ??－１７－??

ｌｅｒ？９６?（瑞士）的９６孔板中，設(shè)計(jì)ｑＲＴ－ＰＣＲ的反應(yīng)程??序?yàn)椋??９５°Ｃ?２?ｍｉｎ??９４°Ｃ?３０?ｓ?１??６０°Ｃ?１５?ｓ?＞?４０?ｃｙｃｌｅｓ??７２°Ｃ?１０ｓ??３７°Ｃ?３０ｓ??使用２－ａａＣＴ法計(jì)算基因的表達(dá)豐富度，不同部位的表達(dá)量的計(jì)算以根中表達(dá)量記為??１，茉莉酸甲酯處理下的基因表達(dá)量以未經(jīng)處理的植物葉片中的表達(dá)量為１。??３．３結(jié)果與分析??３．３．１?ＣＶＤＡＴ？基因ＯＲＦ的克隆與序列分析??神農(nóng)香菊葉片總ＲＮＡ?（圖３－１）的電泳圖片表明，５ｓ、１８ｓ和２８ｓ的三條核糖體帶??清晰，說(shuō)明提取出來(lái)的ＲＮＡ具有良好的完整性，無(wú)降解現(xiàn)象，可以用于下一步的反轉(zhuǎn)??錄和基因克隆實(shí)驗(yàn)。??圖３－１神農(nóng)香菊葉片ＲＮＡ電泳圖??Ｆｉｇ．?３－１?Ｑｕａｎｔｉｔｙ?ｏｆ?ｅｘｔｒａｃｔｅｄ?ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ?ｏｆ?Ｃ．?ｉｎｄｉｃｕｍ?ａｒｏｍａｔｉｃｕｍ??利用設(shè)計(jì)好的特異性引物ＣｉＤＸＲ－Ｆ／ＣｉＤＸＲ－Ｒ，以神農(nóng)香菊總ＲＮＡ反轉(zhuǎn)錄獲得的??ｃＤＮＡ為模板，利用ＰＣＲ擴(kuò)增獲得目的片段（圖３－２），可以看出最明亮的條帶在??１５００ｂｐ附近，和前期轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中所預(yù)測(cè)的長(zhǎng)度相近。將剩余ＰＣＲ產(chǎn)物進(jìn)行膠回收，??連接ｐＵＣ－Ｔ載體，轉(zhuǎn)入￡?Ｃ〇／／ＤＨ５ａ感受態(tài)細(xì)胞中，將轉(zhuǎn)化好的菌液涂在含有５０ｍｇ／Ｌ??的Ａｍｐ的ＬＢ抗性培養(yǎng)基中，在３７?°Ｃ下恒溫培養(yǎng)１２ｈ－１６ｈ。通過(guò)ＰＣＲ擴(kuò)增篩選出１０??個(gè)陽(yáng)性克隆（圖３－３），選�。硞�(gè)最亮的條帶進(jìn)行測(cè)序。測(cè)序結(jié)果顯示：開(kāi)放閱讀框??（ＯＲＦ）的長(zhǎng)度為１４１９ｂｐ，編碼４７２個(gè)氨基酸的多肽鏈（圖３－４），該序列具有３個(gè)保??守

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]黃花蒿HMGR啟動(dòng)子活性表達(dá)及核心序列分析[J]. 龍金花,向奕,肖文軍,劉碩謙.  中草藥. 2016(19)
[2]枇杷DXR基因的克隆及其在果實(shí)成熟過(guò)程中的表達(dá)分析[J]. 張玲,林順權(quán),胡又厘,鄭婷婷,楊向暉.  果樹(shù)學(xué)報(bào). 2013(04)
[3]過(guò)量表達(dá)DXR基因提高青蒿中青蒿素的含量[J]. 陳韻斐,張芳源,唐克軒.  上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(農(nóng)業(yè)科學(xué)版). 2012(05)
[4]油茶乙酰CoA�；D(zhuǎn)移酶基因cDNA克隆及序列特征分析[J]. 張琳,譚曉風(fēng),胡姣,姚小華,林萍.  中南林業(yè)科技大學(xué)學(xué)報(bào). 2011(08)
[5]種子特異性啟動(dòng)子的研究進(jìn)展[J]. 李吉濤,郭建春.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2008(04)
[6]植物萜類(lèi)代謝工程[J]. 韓軍麗,李振秋,劉本葉,王紅,李國(guó)鳳,葉和春.  生物工程學(xué)報(bào). 2007(04)
[7]植物基因啟動(dòng)子的類(lèi)型及其應(yīng)用[J]. 胡廷章,羅凱,甘麗萍,石汝杰.  湖北農(nóng)業(yè)科學(xué). 2007(01)
[8]啟動(dòng)子的克隆和研究方法[J]. 況守龍,胡廷章.  重慶工學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2007(01)
[9]植物類(lèi)萜生物合成途徑及關(guān)鍵酶的研究進(jìn)展[J]. 馬靚,丁鵬,楊廣笑,何光源.  生物技術(shù)通報(bào). 2006(S1)
[10]茉莉酸甲酯:一種重要的植物信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子[J]. 薛仁鎬,金圣愛(ài).  生物技術(shù)通訊. 2006(06)

博士論文
[1]蘋(píng)果HMGR基因家族啟動(dòng)子的克隆及功能分析[D]. 呂東梅.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016

碩士論文
[1]鹽穗木轉(zhuǎn)錄因子HcSCL13啟動(dòng)子活性及鹽響應(yīng)調(diào)控機(jī)制的初探[D]. 馮肖莉.新疆大學(xué) 2019
[2]HMGR與DXR基因過(guò)表達(dá)對(duì)雷公藤萜類(lèi)物質(zhì)生物合成的影響[D]. 郭嘉.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2015
[3]山核桃CcLFY基因啟動(dòng)子的克隆及功能分析[D]. 李崢.浙江農(nóng)林大學(xué) 2012



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