研究背景與目的:耐輻射奇球菌（Deinococcus radiodurans,DR）是一種耐受極端電離輻射的微生物。PprI在耐輻射奇球菌中起輻射響應(yīng)總開關(guān)作用,PprM可能是一種PprI依賴的輻射響應(yīng)的新型調(diào)控蛋白。本實驗旨在構(gòu)建穩(wěn)定遺傳表達抗輻射基因pprM/pprI的果蠅模型。研究抗輻射基因pprM/pprI轉(zhuǎn)入果蠅后輻射抗性的影響,為輻射損傷治療提供新思路。為監(jiān)測核事故泄漏生物計量以及進一步研究耐輻射奇球菌的輻射防御機制及人類的輻射醫(yī)學(xué)防護提供一定的實驗依據(jù)。研究方法:1、用pGEX-6p-1-pprM、pDsRed1-N1-flag-pprI為PCR底物模板,擴增pprM、pprI基因,構(gòu)建pattb-UAST-HA-pprM和pattb-UAST-HA-pprI載體。2、果蠅顯微注射技術(shù)將pattb-UAST-HA-pprM和pattb-UAST-HA-pprI載體注射入果蠅胚胎中,構(gòu)建轉(zhuǎn)基因果蠅模型。3、提取輻照前后果蠅的總蛋白,并分別檢測轉(zhuǎn)基因果蠅和對照果蠅的總超氧化物歧化酶（SOD）活力、還原型谷胱甘肽（GSH）含量、過氧化氫酶（CAT）活力以及丙二醛（MDA）含量。... 

【文章來源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

8.4轉(zhuǎn)基因果蠅的平衡與定位Figure2.2.8.4balanceandpositioningoftransgenicfruitflies

圖 2.3.1 PCR 擴增目的基因 pprM 電泳圖 pprM electrophoresis of the target gene amplified by PM：DNAmarker；1：pGEX-6p-1-pprM PCR 產(chǎn)物ST-pprM 載體的鑒定的抗性 LB 平板上隨機挑取單菌落，進行菌落抽提，用 EcoRI 和 XbaI 對提取的質(zhì)粒載體進ttb-UAST-pprM 酶切產(chǎn)物的大小與目的基因 p對應(yīng)，2.3.2 右圖 1 泳道菌落 PCR 目的基因 pNAmarker 位置接近。圖 2.3.3 部分 pattb-UAST 比對結(jié)果說明目的基因 pprM 成功插入到 pa證明 pattb-UAST-pprM 載體構(gòu)建成功。

圖 2.3.1 PCR 擴增目的基因 pprM 電泳圖.1 The pprM electrophoresis of the target gene amplified by PCRM：DNAmarker；1：pGEX-6p-1-pprM PCR 產(chǎn)物b-UAST-pprM 載體的鑒定克隆的抗性 LB 平板上隨機挑取單菌落，進行菌落 PCR，利質(zhì)粒抽提，用 EcoRI 和 XbaI 對提取的質(zhì)粒載體進行酶切知，pattb-UAST-pprM 酶切產(chǎn)物的大小與目的基因 pprM 和大小相對應(yīng)，2.3.2 右圖 1 泳道菌落 PCR 目的基因 pprM 的00bpDNAmarker 位置接近。圖 2.3.3 部分 pattb-UAST-pprM BLAST 比對結(jié)果說明目的基因 pprM 成功插入到 pattb-UAS變，證明 pattb-UAST-pprM 載體構(gòu)建成功。

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3460711