發(fā)布時間：2021-10-23 14:02

　　目的克隆表達矮稈蓖麻（Ricinus communis L）天冬氨酸蛋白酶（aspartic protease,AP）基因（RcAP）并進行蛋白純化。方法 Q-PCR法驗證高稈及矮稈蓖麻六葉期葉片RcAP基因表達量;提取矮稈蓖麻六葉期葉片總RNA,PCR擴增RcAP基因,克隆至pETM30載體中,構(gòu)建重組表達質(zhì)粒pETM30-RcAP[含谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶（glutathione-Stransferase,GST）標(biāo)簽],轉(zhuǎn)化至E.coli DH5α感受態(tài)細胞中,優(yōu)化IPTG誘導(dǎo)濃度及溫度,SDS-PAGE分析目的蛋白的可溶性;采用親和層析純化重組蛋白GST-RcAP。結(jié)果矮稈蓖麻RcAP基因表達量為高稈蓖麻RcAP基因的3.7倍;經(jīng)PCR及雙酶切鑒定,重組表達質(zhì)粒pETM30-RcAP構(gòu)建正確;最適誘導(dǎo)條件為0.1 mmol/L IPTG 16℃誘導(dǎo);重組蛋白GST-RcAP以可溶形式表達,相對分子質(zhì)量約為62 000;純化的重組蛋白GST-RcAP濃度為6 mg/mL。結(jié)論成功構(gòu)建了重組表達質(zhì)粒pETM30-RcAP,獲得了可溶性重組蛋白GST-RcAP,本研究為解析RcAP蛋白... 

【文章來源】：中國生物制品學(xué)雜志. 2020,33(10)CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

Rc AP基因m RNA相對表達量驗證結(jié)果

Rc AP基因PCR產(chǎn)物電泳圖

重組蛋白GST-Rc AP經(jīng)12%SDS-PAGE分析，相對分子質(zhì)量約為61 000，以可溶形式存在于上清中，可用于目的蛋白的純化，見圖7。圖4 重組表達質(zhì)粒p ETM30-Rc AP的雙酶切鑒定（NcoⅠ/XhoⅠ）

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3453318