目的研究微RNA-129-5p（miR-129-5p）靶向Fas相關(guān)死亡功能域蛋白（FADD）基因?qū)θ俗甸g盤(pán)髓核細(xì)胞（hNPC）凋亡的影響,并探討其作用機(jī)制。方法運(yùn)用脂質(zhì)體法將miR-219-5p抑制子轉(zhuǎn)染至hNPC中抑制miR-219-5p表達(dá),將pcDNA-FADD轉(zhuǎn)染至hNPC中使FADD過(guò)表達(dá),將miR-219-5p抑制子和FADD siRNA共轉(zhuǎn)染至hNPC中抑制miR-219-5p和FADD表達(dá)。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡率,蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)抑制miR-219-5p表達(dá)后hNPC細(xì)胞中FADD、半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）、Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)量。通過(guò)Targetscan軟件預(yù)測(cè)miR-129-5p和FADD靶向結(jié)合位點(diǎn),采用雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)檢測(cè)二者的靶向關(guān)系。結(jié)果抑制miR-219-5p、過(guò)表達(dá)FADD均可明顯促進(jìn)hNPC凋亡。Targetscan軟件預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)FADD 3′-UTR上存在miR-219-5p的結(jié)合位點(diǎn),雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)證實(shí)miR-129-5p和FADD具有靶向結(jié)合關(guān)系。抑制miR-219-5p的表達(dá)后,hNPC中FADD表... 

【文章來(lái)源】：脊柱外科雜志. 2020,18(03)

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【部分圖文】：

過(guò)表達(dá)FADD誘導(dǎo)hNPC凋亡

實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果顯示,anti-miR組hNPC中miR-129-5p的表達(dá)量與anti-miR-con組相比明顯降低(P < 0.05,圖1),表明miR-129-5p的表達(dá)被成功抑制。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示,與anti-miR-con組相比,anti-miR組hNPC的凋亡率明顯升高(P < 0.05,圖2)。蛋白質(zhì)印跡分析結(jié)果顯示,與anti-miR-con組相比,anti-miR組hNPC中促凋亡相關(guān)蛋白活化型Caspase-3表達(dá)上調(diào)(P < 0.05),抑凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2表達(dá)下調(diào)(P < 0.05),Bax蛋白表達(dá)量無(wú)明顯變化(圖3),結(jié)果表明抑制miR-129-5p表達(dá)能明顯促進(jìn)hNPC凋亡。圖2 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)抑制mi R-129-5p表達(dá)后h NPC的凋亡率

流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)抑制mi R-129-5p表達(dá)后h NPC的凋亡率

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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