柑橘木虱Diaphorina citri是柑橘黃龍病菌主要的傳播媒介,具有獲菌時間短,傳毒效率高等特點。目前尚無有效治療柑橘黃龍病的方法,因此,對柑橘木虱的防控成為控制柑橘黃龍病擴散蔓延的最為重要的環(huán)節(jié)之一。目前,化學(xué)防治仍是最為常用的柑橘木虱的防控方法,但化學(xué)農(nóng)藥的不合理使用引起的環(huán)境污染日益嚴(yán)重,同時還導(dǎo)致柑橘木虱的抗藥性逐年增加。據(jù)報道,柑橘木虱對毒死蜱、吡蟲啉等藥劑產(chǎn)生了抗藥性而昆蟲抗藥性的產(chǎn)生與解毒代謝酶直接相關(guān),因此,有必要明確柑橘木虱的解毒代謝酶的生物信息學(xué)特性,為其抗性分子機制研究及田間抗性治理奠定理論基礎(chǔ)。本學(xué)術(shù)論文基于柑橘木虱基因組,鑒定和注釋主要的解毒代謝酶基因,并對其進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析;利用q PCR技術(shù)對這些基因在柑橘木虱不同組織和經(jīng)不同藥劑誘導(dǎo)后的表達(dá)模式進(jìn)行解析;最后通過分子克隆技術(shù),克隆獲得Dcit CYP4C4基因的c DNA全長序列,利用RNAi和生物測定技術(shù)分析Dcit CYP4C4基因在柑橘木虱對吡蟲啉和毒死蜱藥劑敏感性中的作用。研究成果為柑橘木虱解毒代謝機制的理解以及P450基因在抗藥性形成過程中的作用提供理論依據(jù)。本研究主要結(jié)果如下:1柑橘木虱... 

【文章來源】：西南大學(xué)重慶市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
文獻(xiàn)綜述
    1 柑橘木虱
        1.1 柑橘木虱的分布及重要性
        1.2 柑橘木虱的形態(tài)及生物學(xué)特征
        1.3 柑橘木虱的防治方法
    2 柑橘黃龍病
        2.1 柑橘黃龍病的分布及危害
        2.2 柑橘黃龍病的傳播
    3 昆蟲的抗藥性的分子機理
        3.1.1 谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶
        3.1.2 非特異性酯酶
        3.1.3 細(xì)胞色素P450
引言
    1 本研究的背景及意義
    2 研究思路
第一章 基于柑橘木虱基因組的三大解毒代謝酶基因鑒定
    1 材料與方法
        1.1 物種基因組數(shù)據(jù)庫
        1.2 柑橘木虱解毒代謝酶基因序列的檢索與鑒定
        1.3 柑橘木虱三大解毒代謝酶基因的系統(tǒng)發(fā)育分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 柑橘木虱GST基因的鑒定與進(jìn)化分析
        2.2 柑橘木虱ESTs基因的鑒定與進(jìn)化分析
        2.3 柑橘木虱P450基因的鑒定與進(jìn)化分析
    3 小結(jié)
第二章 柑橘木虱解毒代謝酶表達(dá)模式解析
    1 材料與方法
        1.1 供試蟲源
        1.2 主要試劑(盒)及儀器
        1.3 總RNA提取
        1.4 總RNA中 g DNA的去除
        1.5 cDNA合成
        1.6 引物設(shè)計與合成
        1.7 標(biāo)準(zhǔn)曲線和熒光定量PCR
        1.8 數(shù)據(jù)分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 CYP響應(yīng)藥劑脅迫及不同組織下的表達(dá)模式解析
        2.2 GST響應(yīng)藥劑脅迫及不同組織下的表達(dá)模式解析
        2.3 ESTs響應(yīng)藥劑脅迫及不同組織下的表達(dá)模式解析
    3 小結(jié)
第三章 柑橘木虱Dcit CYP4C4 的克隆及序列分析
    1 材料與方法
        1.1 供試蟲源
        1.2 主要試劑(盒)及儀器
        1.3 總RNA的提取
        1.4 總RNA中 g DNA的去除
        1.5 cDNA合成
        1.6 引物設(shè)計與合成
        1.7 PCR的擴增
        1.8 克隆
        1.9 柑橘木虱Dcit CYP4C4 基因序列及系統(tǒng)發(fā)育分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 柑橘木虱Dcit CYP4C4 基因的克隆及序列分析
        2.2 柑橘木虱Dcit CYP4C4 基因同源性分析
    3 小結(jié)
第四章 柑橘木虱Dcit CYP4C4 的功能驗證
    1 材料與方法
        1.1 供試質(zhì)粒
        1.2 供試蟲源
        1.3 主要試劑盒與儀器
        1.4 dsRNA引物設(shè)計
        1.5 dsRNA合成
        1.6 高濃度DNA模板合成
        1.7 PCR產(chǎn)物電泳后進(jìn)行膠回收
        1.8 dsRNA合成與純化
        1.9 dsRNA點滴
        1.10 生物測定及死亡率統(tǒng)計
        1.11 柑橘木虱RNA干擾水平檢測
        1.12 原核表達(dá)
    2 結(jié)果與分析
        2.1 柑橘木虱Dcit CYP4C4 基因沉默效率檢測
        2.2 Dcit CYP4C4 干擾后柑橘木虱對吡蟲啉和毒死蜱的敏感性測定
        2.3 原核表達(dá)
    3 小結(jié)
第五章 主要結(jié)果與展望
    1 主要結(jié)果
    2 展望
參考文獻(xiàn)
附錄
在讀期間發(fā)表的論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]昆蟲抗藥性產(chǎn)生機制[J]. 吳有剛,金京,楊勝祥,吳屏,胡琴,杜永斌,樊建庭.  生物安全學(xué)報. 2019(03)
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[3]亞洲柑橘木虱的發(fā)生與防治研究進(jìn)展[J]. 姚廷山,周彥,周常勇.  果樹學(xué)報. 2018(11)
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[5]亞洲柑橘木虱的生物學(xué)研究進(jìn)展及防治[J]. 余繼華,黃振東,張敏榮,張寧,李萍,盧璐,楊曉.  植物檢疫. 2018(05)
[6]擬除蟲菊酯類殺蟲劑對赤擬谷盜CYP4基因的誘導(dǎo)表達(dá)特性[J]. 梁曉,伍春玲,陳青,徐雪蓮.  熱帶作物學(xué)報. 2018(07)
[7]灰飛虱羧酸酯酶LsCarE1介導(dǎo)殺蟲劑抗性[J]. 王芮,張浩淼,鄧?yán)?肖倩倩,王秋霞,劉廣娜,韓召軍,吳敏.  昆蟲學(xué)報. 2017(09)
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博士論文
[1]飛蝗羧酸酯酶基因轉(zhuǎn)錄組分析及殺蟲劑解毒功能研究[D]. 張建琴.山西大學(xué) 2014

碩士論文
[1]褐飛虱細(xì)胞色素單加氧酶基因的功能分析[D]. 勞淑華.浙江大學(xué) 2016



本文編號：3447646