目的探討雌激素（E2）對(duì)人乳腺惡性轉(zhuǎn)化上皮細(xì)胞GREB1基因表達(dá)、細(xì)胞生長(zhǎng)的影響及GPER-鈣蛋白酶2（CANP2）信號(hào)活動(dòng)在其中的介導(dǎo)作用,深入了解E2生物學(xué)作用的信號(hào)機(jī)制。方法:用自制乳腺癌細(xì)胞（E2誘導(dǎo)的乳腺上皮轉(zhuǎn)化細(xì)胞）為研究模型,MCF-7細(xì)胞為體外實(shí)驗(yàn)對(duì)照。制備乳腺癌細(xì)胞:將MCF-10A細(xì)胞用E2連續(xù)刺激至第13代,標(biāo)記為（P13）,顯微鏡觀察細(xì)胞轉(zhuǎn)化形態(tài)變化,裸鼠實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)化細(xì)胞惡性程度;將轉(zhuǎn)化細(xì)胞和MCF-7加E2刺激后,平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)E2對(duì)轉(zhuǎn)化細(xì)胞增殖水平,qRT-PCR檢測(cè)GREB1基因表達(dá);轉(zhuǎn)化細(xì)胞和MCF-7加GPER特異性抑制劑G15、CANP特異性抑制劑calpeptin（Calp）預(yù)處理及shRNA-CANP2轉(zhuǎn)染干預(yù)后,平板克隆形成實(shí)驗(yàn)、qRT-PCR分別檢測(cè)G15、Calpeptin、shRNA-Calpain2對(duì)E2刺激轉(zhuǎn)化細(xì)胞增殖增加和GREB1表達(dá)上調(diào)的影響。結(jié)果（1）E2誘導(dǎo)的惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞模型建立:1)以E2連續(xù)刺激MCF-10A至P13代細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化:模型細(xì)胞接觸抑制消失,細(xì)胞胞體變大,出現(xiàn)較多克隆小球;2)模型細(xì)胞裸鼠乳腺脂肪墊... 

【文章來源】：貴州醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁數(shù)】：47 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

-1E2誘導(dǎo)MCF-10A細(xì)胞形態(tài)變化（200×）

圖 2-1-1E2 誘導(dǎo) MCF-10A 細(xì)胞形態(tài)變化（200×）Fig.2-1-1E2 induced morphology changes of MCF-10A cells（200×）E2 誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)化細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)成瘤將建立好的 MCF-10A 模型細(xì)胞 DMSO 組和 E2 組（P13），接種在裸鼠墊上，待皮丘吸收完全 1 周后開始觀察裸鼠接種部位成瘤情況。成瘤實(shí)對(duì)照組無腫塊形成（0/5），而 E2 組有腫塊形成（7/10）（圖 2-1-2a），當(dāng)至第 11 天，取出腫瘤（圖 2-1-2b）。

圖 2-2-1E2 促進(jìn)轉(zhuǎn)化細(xì)胞的增殖能力Fig.2-2-1E2 promoted the proliferation of transformed cells.2.2E2 上調(diào)轉(zhuǎn)化細(xì)胞 GREB1 基因表達(dá)E2 可上調(diào)轉(zhuǎn)化細(xì)胞 GREB1 基因表達(dá)，與對(duì)照相比表達(dá)增加（114.04±7.28）**P<0.01），（圖 2-2-2a）。乳腺癌 MCF-7 細(xì)胞在 E2 刺激下，GREB1 基因表上調(diào)，增加了（52.02±5.39）%（*P<0.05），（圖 2-2-2b）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]雌激素與乳腺癌關(guān)系的研究進(jìn)展[J]. 孫曉寅,莊志剛.  世界臨床藥物. 2017(12)
[2]雌激素受體與腫瘤發(fā)生的研究進(jìn)展[J]. 謝辛慈,吳佳,潘芬芬,姚岑萍,舒建洪,陳健,呂正兵.  藥物生物技術(shù). 2015(02)
[3]鈣蛋白酶在乳腺上皮轉(zhuǎn)化細(xì)胞對(duì)雌激素刺激反應(yīng)中的作用[J]. 楊莉,朱筑霞,劉曉紅,胡曉霞,王紅梅,王旭東.  基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床. 2013(07)
[4]雌二醇通過鈣離子/鈣激活中性蛋白酶通路誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞遷移及FAK蛋白剪切[J]. 武春蘭,李陽,劉曉紅,侯建美,朱筑霞,楊莉,王旭東.  腫瘤防治研究. 2012(09)
[5]雌激素受體在腫瘤中的生物學(xué)作用[J]. 王雪瑩,王瑞安.  現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué). 2012(03)
[6]雌激素受體信號(hào)通路在乳腺癌發(fā)生和治療中的作用[J]. 譚小寧,周知,謝小雷,羅志勇.  生命科學(xué). 2011(10)
[7]雌激素核外受體和核受體作用的整合[J]. 李梨,吳婷婷,劉智敏.  生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志. 2010(04)



本文編號(hào)：3436293