棉花作為我國重要的經(jīng)濟(jì)作物,常遭受多種病原菌的侵襲,從而影響棉花的產(chǎn)量和品質(zhì)問題。其中,棉花枯萎病由棉花枯萎病菌引起,是影響棉花生產(chǎn)的主要病害。為了抵御病害的侵襲,植物在長期的進(jìn)化過程中形成了一系列的應(yīng)答機(jī)制。促分裂原活化蛋白激酶（MAPK）級聯(lián)途徑普遍存在于真核生物中,是一類高度保守的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,在病原物誘導(dǎo)的抗病反應(yīng)中發(fā)揮著重要的作用。到目前為止,關(guān)于MAPK調(diào)控棉花對枯萎病抗性的研究鮮有報(bào)道。因此,利用分子生物學(xué)的方法研究MAPK對棉花枯萎病的調(diào)控,對于提高棉花對枯萎病的抗性有著重要的理論及實(shí)踐意義。在本研究中,我們從陸地棉中分離出一個(gè)MAPK基因GhMPK4,通過對其進(jìn)行表達(dá)特性分析和生物學(xué)功能分析,初步發(fā)現(xiàn)GhMPK4在抵抗棉花枯萎病脅迫過程中發(fā)揮著重要作用。具體結(jié)果如下:（1）通過PCR的方法獲得GhMPK4的編碼區(qū)序列,其長度為1137bp,編碼378個(gè)氨基酸多肽,預(yù)測蛋白分子量為43.37kDa,等電點(diǎn)為6.6。通過氨基酸序列比對以及進(jìn)化樹分析發(fā)現(xiàn),GhMPK4屬于B組MAPK。（2）亞細(xì)胞定位實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)GhMPK4定位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中。說明GhMPK4可能在細(xì)胞質(zhì)和... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

真核生物中MAPK級聯(lián)途徑的概述（Camilleetal.,2017）

圖 1-2 MAPK 級聯(lián)途徑在響應(yīng)病原菌反應(yīng)中參與多種信號通路（Meng et al., 2013）Fig. 1-2 MAPK cascade pathway participated in multiple signaling pathways in response to pathogen defense (Meng et al.,2013)1.3.2 MAPK 級聯(lián)途徑介導(dǎo)的植物抗病信號通路近年來，有研究報(bào)道 MAPK 級聯(lián)途徑在植物抗病信號通路中發(fā)揮著重要作用，而且是病原觸發(fā)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的重要通路（Zhang and Klessig, 2001；Nakagami et al., 2005）。在 擬 南 芥 中 ， 第 一 個(gè) 分 離 出 的 比 較 完 整 的 信 號 轉(zhuǎn) 導(dǎo) 通 路 是FLS2-MEKK1-MKK4/5-MPK3/6-WRKY22/29，該信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路可以有效地抵抗各種病原菌，主要包括細(xì)菌和真菌病原葡萄球孢菌（Asai et al., 2002；Galletti et al., 2011）。在擬南芥中，分離出的 MEKK1-MKK1/2-MPK4 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路主要參與調(diào)控對病原菌的應(yīng)答反應(yīng)，該信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路不僅參與對活體病原菌的負(fù)調(diào)控反應(yīng)，而且參與對死體病原菌的正調(diào)控反應(yīng)（Petersen et al., 2000；Ichimura et al., 2002；Qiu et al., 2008）。有研究報(bào)

K4 基因的分離公布的陸地棉核苷酸序列（FJ966893.1），設(shè)計(jì)引物 M為模板進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)，通過瓊脂糖凝膠電泳檢測。從圖 3-1 中可以看出，以 Marker（DL10000）為對 2000bp 之間，約為 1137bp，并與兩條引物之間的序膠回收，與克隆載體 pEASY-T1 simple 連接，然后轉(zhuǎn)克隆菌液送公司進(jìn)行測序。用 DNAman 和 DNAclu物，序列比對后發(fā)現(xiàn)與克隆的片段完全一致，并且可過 PCR 擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)說明，分離的目的片段就是陸地棉

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3431498