本文關(guān)鍵詞：大鯢蛙病毒感染大鯢的組織嗜性、病理?yè)p傷及對(duì)MHC類基因表達(dá)量影響的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：為研究大鯢蛙病毒(CGSRV)感染大鯢的組織嗜性、動(dòng)態(tài)病理?yè)p傷及對(duì)MHC基因表達(dá)量的影響,以1.0×106.5TCID50ml-1濃度的CGSRV腹腔注射感染大鯢(體重280.3±20.2g,體長(zhǎng)33.9±2.3cm),在感染的Od、3d、5d、7d、9d、13d、16d隨機(jī)剖殺3尾,采取肝、腎、脾、肺、腸、皮膚肌肉、腦、心和胃等組織,石蠟切片和HE染色對(duì)CGSRV感染大鯢的病理?yè)p傷過(guò)程進(jìn)行觀察,qPCR技術(shù)對(duì)病毒的組織嗜性及動(dòng)態(tài)定量分布進(jìn)行研究。結(jié)果顯示感染大鯢的臨床特征為體表黏液分泌增多,食欲下降甚至廢絕,四肢與頭部腫脹,皮膚肌肉出血、潰爛等。剖檢發(fā)現(xiàn),感染后3d肝、脾、腎腫大；7-9d出現(xiàn)腹水,胃腸道空虛,肺出血,脾局灶性壞死：13--16d肝腫大、淤血,呈花斑狀,脾多灶性壞死,腎腫大、點(diǎn)狀出血,胃腸道內(nèi)充滿淡黃色粘稠物。病理組織學(xué)上,CGSRV感染導(dǎo)致大鯢多組織、器官損傷,其中肝、脾、腎和皮膚肌肉病變嚴(yán)重,為損傷靶器官,且在一些損傷的細(xì)胞內(nèi)見(jiàn)嗜堿性或嗜酸性包涵體。感染后3d肝細(xì)胞與腎小管上皮細(xì)胞變性,腎間以及肝小葉中央靜脈周圍淋巴細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)；5-7d實(shí)質(zhì)性器官變性、壞死、炎癥加重,胃腸道呈卡他性炎。9d表皮細(xì)胞壞死、脫落,肌纖維變性、壞死。13-16d肝廣泛變性、壞死與炎癥,脾淋巴細(xì)胞數(shù)量顯著減少,腎小球滲出性-壞死性炎,皮膚肌肉呈出血性-壞死性炎和實(shí)質(zhì)性心肌炎。SYBRGreen qPCR結(jié)果顯示,整個(gè)感染進(jìn)程中各組織CGSRV含量呈上升趨勢(shì),不同組織病毒量在789×102-4.61×108copies/ug DNA之間,其中肺、腸、肝、脾、腎和皮膚肌肉含量高,表明CGSRV具有廣泛的組織嗜性,但肝、脾、腎、皮膚肌肉為其復(fù)制和損傷的靶器官,且病毒分布量與病理?yè)p傷呈正相關(guān)。采用qPCR技術(shù)在CGSRV感染大鯢的0d、3d、5d、7d、9d、13d、16d對(duì)大鯢肝、脾、腎、腸、胃、皮膚、肺、肌肉等組織、器官中MHCI和MHCII類基因的表達(dá)影響進(jìn)行了研究。結(jié)果顯示,CGSRV感染能引起所有被檢組織中MHC I、IIA和ⅡB基因表達(dá)變化,其中MHCI和MHCIIA基因表達(dá)量高,與Od表達(dá)量差異顯著,MHCIIB基因表達(dá)量變化較小,但上述3種MHC基因都呈先上升后降低趨勢(shì),具有時(shí)間依賴性和組織差異性。感染后3d,肝、脾、腎、肺與腸中3種MHC基因極顯著上調(diào)(P0.01),5-9d相繼上調(diào)到最大值,隨后下降。感染后5-7d,皮膚肌肉出現(xiàn)上調(diào)(P0.01),達(dá)峰值后出現(xiàn)下降趨勢(shì),且表達(dá)量豐富,直到16d基因表達(dá)量仍顯著高于其他各組織表達(dá)7水平。結(jié)果表明CGSPV感染對(duì)大鯢MHC基因表達(dá)有明顯影響,大鯢MHC在抗CGSRV感染的過(guò)程中有重要作用。
【關(guān)鍵詞】：大鯢(Andrias davidianus) 大鯢蛙病毒(CGSRV) 組織嗜性 病理?yè)p傷 MHC基因表達(dá)
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S947.3
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-7
• 簡(jiǎn)縮詞表7-10
• 第一章 文獻(xiàn)綜述10-20
• 1 蛙病毒分類10
• 2 蛙病毒生物學(xué)特征10-11
• 3 蛙病毒的分布與危害11-12
• 4 蛙病毒感染的診斷與防治12-14
• 5 蛙病毒感染后在宿主體內(nèi)的分布14
• 6 蛙病毒感染的組織病理?yè)p傷14-15
• 7 病原感染對(duì)宿主免疫相關(guān)基因表達(dá)的影響15-19
• 7.1 主要組織相容性復(fù)合體(MHC)15-17
• 7.1.1 MHC結(jié)構(gòu)和功能15-16
• 7.1.2 MHC基因在組織中的表達(dá)16
• 7.1.3 MHC與抗病之間的關(guān)系16-17
• 7.2 其他免疫相關(guān)因子17-19
• 8 研究的目的和意義19-20
• 第二章 CGSRV感染后的組織病理學(xué)研究20-30
• 1 材料20-21
• 1.1 動(dòng)物20
• 1.2 主要試劑、材料20-21
• 1.3 主要儀器21
• 2 方法21-22
• 2.1 人工感染與臨床癥狀觀察21
• 2.2 剖檢變化觀察與樣品采集21
• 2.3 組織病理?yè)p傷觀察21-22
• 2.3.1 石蠟切片的制備21-22
• 2.3.2 結(jié)果觀察22
• 3 結(jié)果22-28
• 3.1 CGSRV感染后臨床癥狀與剖檢變化觀察22-23
• 3.2 組織病理變化23-28
• 4 討論28-30
• 4.1 CGSRV感染大鯢的臨床癥狀28
• 4.2 CGSRV感染大鯢的組織病理?yè)p傷特點(diǎn)28-30
• 第三章 CGSRV感染大鯢的組織嗜性與分布研究30-38
• 1 材料30
• 2 方法30-32
• 2.1 樣品采集30-31
• 2.2 組織DNA提取31
• 2.3 qPCR方法靈敏度測(cè)定以及標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立31-32
• 2.3.1 質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品濃度測(cè)定及拷貝數(shù)計(jì)算31
• 2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立以及擴(kuò)增靈敏度檢測(cè)31-32
• 2.3.3 qPCR定量檢測(cè)CGSRV組織分布情況32
• 3 結(jié)果32-35
• 3.1 引物溶解曲線分析32
• 3.2 擴(kuò)增曲線以及標(biāo)準(zhǔn)曲線32-33
• 3.3 CGSRV感染后病毒在體內(nèi)的動(dòng)態(tài)分布33-35
• 4 討論35-38
• 4.1 病原在組織中分布的檢測(cè)方法分析35-36
• 4.2 CGSRV動(dòng)態(tài)分布與組織嗜性分析36-38
• 第四章 CGSRV感染對(duì)大鯢MHC基因表達(dá)影響的研究38-51
• 1 材料38
• 2 方法38-41
• 2.1 樣品采集38-39
• 2.2 總RNA的提取和cDNA的合成39-40
• 2.2.1 組織RNA提取39
• 2.2.3 cDNA合成39-40
• 2.3 MHC基因在組織中表達(dá)量的測(cè)定40-41
• 2.3.1 引物的設(shè)計(jì)與合成40-41
• 2.3.2 大鯢組織中MHC基因的檢測(cè)41
• 2.4 數(shù)據(jù)處理分析41
• 3 結(jié)果41-48
• 3.1 CGSRV感染對(duì)大鯢MHC Ⅰ基因表達(dá)量的影響42-44
• 3.2 CGSRV感染對(duì)大鯢MHC ⅡA基因表達(dá)量的影響44-46
• 3.3 CGSRV感染對(duì)大鯢MHC ⅡB基因表達(dá)量的影響46-48
• 4 討論48-51
• 結(jié)論51-52
• 參考文獻(xiàn)52-59
• 致謝59-60
• 作者攻讀碩士學(xué)位期間參與發(fā)表的學(xué)術(shù)論文60

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