發(fā)布時(shí)間：2021-10-01 06:01

　　目的:通過(guò)研究SAE2基因過(guò)表達(dá)和SAE2基因干擾表達(dá)的膽管癌細(xì)胞株的細(xì)胞增殖活性、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞侵襲力的改變,探究SAE2基因?qū)δ懝馨┘?xì)胞上皮間質(zhì)化（EMT）的影響。方法:應(yīng)用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法,通過(guò)轉(zhuǎn)染膽管癌系細(xì)胞,將SAE2基因重組真核表達(dá)質(zhì)粒,建立穩(wěn)定表達(dá)的SAE2基因細(xì)胞株。將其分為以下3組:SAE2過(guò)表達(dá)組,敲減SAE2組和空質(zhì)粒組。RT-PCR及Western blot法可以通過(guò)追蹤熒光來(lái)判斷SAE2mRNA水平及蛋白水平的變化;各組細(xì)胞增殖MTT和流式細(xì)胞儀檢測(cè)前顏色的實(shí)驗(yàn)后（FCM）檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡;Transwell細(xì)胞體外侵襲力實(shí)驗(yàn)檢測(cè)腫瘤細(xì)胞入侵的變化。結(jié)果:RT-PCR檢測(cè)和WB檢測(cè)結(jié)果顯示,SAE2過(guò)表達(dá)組細(xì)胞中,SAE2 m RNA和蛋白表達(dá)高于敲減SAE2組,SAE2 mRNA和蛋白表達(dá)高于空質(zhì)粒組,兩組比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。敲減SAE2組細(xì)胞中,SAE2 mRNA和蛋白表達(dá)低于空質(zhì)粒組,兩組比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。MTT比色實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果顯示,各組細(xì)胞在1d時(shí),MTT OD值兩組比較差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>... 

【文章來(lái)源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：43 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

各組細(xì)胞SAE2mRNA及蛋白表達(dá)比較

青島大學(xué)碩士學(xué)位論文（P＞0.05），2d 時(shí)，SAE2 過(guò)表達(dá)組細(xì)胞 MTT OD 值高于敲減 S.580, P=0.002），高于空質(zhì)粒組（t=2.493, P=0.037），敲減 SAE2 組 OD 比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），3d 時(shí)，SAE2 過(guò)表達(dá)組細(xì)胞 M敲減 SAE2 組（t=5.349, P=0.001），高于空質(zhì)粒組（t=3.008, P=0.017）胞 MTT OD 值高于敲減 SAE2 組（t=2.327, P=0.048），差異具有統(tǒng)見(jiàn)表 2，圖 2。表 2 各組細(xì)胞增殖活性比較（OD）組別 1d 2d 3dAE2 過(guò)表達(dá)組 0.33±0.08 0.58±0.10*#0.78±0.1敲減 SAE2 組 0.31±0.08 0.33±0.07 0.44±0.空質(zhì)粒組 0.33±0.07 0.43±0.09 0.58±0.注：與敲減 SAE2 組比較，*P＜0.05；與空質(zhì)粒組比較，#P＜0.05

第二章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)數(shù)的百分比低于敲減 SAE2 組（t=2.642, P=0.030），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意表 3，圖 3。表 3 各組細(xì)胞凋亡情況比較（%）組別 1d 2d 3dSAE2 過(guò)表達(dá)組 5.13±0.92 9.62±1.73*#10.87±2.06敲減 SAE2 組 5.17±0.98 13.67±2.13 17.78±2.17空質(zhì)粒組 5.16±0.89 12.93±2.18 14.38±1.89注：與敲減 SAE2 組比較，*P＜0.05；與空質(zhì)粒組比較，#P＜0.05

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]術(shù)前吉西他濱聯(lián)合順鉑新輔助化療在局部晚期非小細(xì)胞肺癌外科手術(shù)的應(yīng)用價(jià)值探討[J]. 姜軍,楊曉光.  中國(guó)醫(yī)藥指南. 2016(30)
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碩士論文
[1]Wentilactone A對(duì)小細(xì)胞肺癌增殖抑制和誘導(dǎo)凋亡的分子機(jī)制研究[D]. 姜文麗.第二軍醫(yī)大學(xué) 2016
[2]海藻糖對(duì)奶山羊睪丸組織冷凍保存效果的影響[D]. 張小剛.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2016
[3]miR-192靶向TCF7基因?qū)侨饬黾?xì)胞增殖和侵襲的抑制作用[D]. 關(guān)紅亞.鄭州大學(xué) 2016
[4]蛋白質(zhì)SUMO化E2連接酶UBE2I與干擾素誘導(dǎo)蛋白Nmi相互作用區(qū)域的研究[D]. 劉勝烽.暨南大學(xué) 2015
[5]SIRT1、acetyl-P53、c-Myc在乳腺癌中的表達(dá)及其對(duì)預(yù)后的影響[D]. 宋新峰.山西醫(yī)科大學(xué) 2013
[6]LPS誘導(dǎo)膽管上皮細(xì)胞Toll樣受體4及上皮—間葉樣表型轉(zhuǎn)化相關(guān)標(biāo)志物表達(dá)變化的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 梁塏.遵義醫(yī)學(xué)院 2013
[7]膽管癌的危險(xiǎn)因素與發(fā)病機(jī)理研究現(xiàn)狀綜述[D]. 閻晶璐.北京中醫(yī)藥大學(xué) 2011
[8]E-鈣粘附素及基質(zhì)金屬蛋白酶-9的表達(dá)與膽管癌浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移和預(yù)后的相關(guān)研究[D]. 汪正廣.安徽醫(yī)科大學(xué) 2003



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