絲裂原活化蛋白激酶MAPK級(jí)聯(lián)反應(yīng)在植物響應(yīng)生物與非生物脅迫中發(fā)揮著重要作用。為了獲得轉(zhuǎn)基因馬鈴薯,進(jìn)一步探索 StMKK1在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和脅迫響應(yīng)中的功能,從四倍體栽培品種馬鈴薯Desiree的cDNA中克隆到 StMKK1基因302 bp的目的片段,并將目的基因的正向片段利用EcoRⅠ和KpnⅠ,反向片段利用HindⅢ和XbaⅠ與重組載體35s-pART27進(jìn)行連接,構(gòu)建成35s- StMKK1-pART27-RNAi表達(dá)載體;利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化方法,將35s- StMKK1-pART27-RNAi載體導(dǎo)入馬鈴薯品種Desiree中,得到7株沉默的陽(yáng)性馬鈴薯轉(zhuǎn)基因植株,不同的轉(zhuǎn)基因植株中 StMKK1基因的沉默效率經(jīng)檢測(cè)均在92%以上。 

【文章來(lái)源】：西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2020,29(12)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：9 頁(yè)

【部分圖文】：

35s-StMKK1-part27-RNAi結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)圖

將PCR鑒定結(jié)果為陽(yáng)性的株系提取總RNA,反轉(zhuǎn)錄后以此為模板，對(duì)外源基因表達(dá)情況進(jìn)行分析。以馬鈴薯的 Stactin-7like基因(XM_006350963)作為內(nèi)參基因，利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)馬鈴薯轉(zhuǎn)化植株葉片中 StMKK1基因的表達(dá)量，結(jié)果表明：與未轉(zhuǎn)化的Desiree相比， StMKK1基因在轉(zhuǎn)基因植株(RNAi-2-RNAi12)中的表達(dá)量均顯著下降(其中RNAi-9植株除外),降幅達(dá)到92%以上，與未轉(zhuǎn)化Desiree相比，RNAi-9植株中 StMKK1基因的表達(dá)量沒(méi)有顯著差異，充分證明轉(zhuǎn)基因植株中 StMKK1基因的表達(dá)基本都受到一定程度的干擾(圖5)。圖4 部分 StMKK1轉(zhuǎn)基因植株的PCR鑒定

部分 StMKK1轉(zhuǎn)基因植株的PCR鑒定

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]CRISPR-Cas9基因編輯技術(shù)在基因功能和作物育種中的研究進(jìn)展[J]. 趙山山,邸一桓,郝光飛.  分子植物育種. 2019(21)
[2]利用CRISPR-Cas9基因編輯技術(shù)獲得水稻OsYUCCA1基因突變體[J]. 何先暢,黃國(guó)強(qiáng),王道洋,常淑偉,張大兵.  基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2017(11)
[3]沉默馬鈴薯Sgt1-3基因減少塊莖糖苷生物堿積累[J]. 安然,張晶晶,郭海霞,石文慧,喬巖,王志偉,石菁,張金文.  中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào). 2017(08)
[4]水稻抗旱基因OsbHLH120 RNAi干擾載體的構(gòu)建及遺傳轉(zhuǎn)化[J]. 劉磊,炎會(huì)敏,杜彥修,張靜,孫紅正,彭廷,趙全志.  分子植物育種. 2015(12)
[5]馬鈴薯ARF基因RNAi載體的遺傳轉(zhuǎn)化及對(duì)其試管薯生理特性的影響[J]. 裴瑞芳,劉英,劉柏林,張寧,司懷軍,王蒂.  草業(yè)學(xué)報(bào). 2015(02)
[6]馬鈴薯產(chǎn)業(yè)的現(xiàn)狀與發(fā)展[J]. 謝從華.  華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(社會(huì)科學(xué)版). 2012(01)
[7]馬鈴薯Desiree遺傳轉(zhuǎn)化體系的優(yōu)化及轉(zhuǎn)基因植株的獲得[J]. 辛翠花,郭江波,黃三文,屈冬玉.  中國(guó)蔬菜. 2011(06)
[8]馬鈴薯Y病毒CP基因RNAi載體構(gòu)建與干涉效果測(cè)定[J]. 李奇科,陶剛,邱又彬,邱礽,遲勝起,朱英,劉作易.  基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2009(03)
[9]MAPK級(jí)聯(lián)途徑在植物信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中的研究進(jìn)展[J]. 陳婭斐,馮斌,趙小明,白雪芳,杜昱光.  植物學(xué)通報(bào). 2005(03)



本文編號(hào)：3412019