目的構(gòu)建E3L基因缺失型痘苗病毒,并評價其毒力和安全性。方法根據(jù)天壇株痘苗病毒全基因組設(shè)計(jì)合成以E3L基因?yàn)橹亟M臂,并含有Loxp序列、早晚期復(fù)合強(qiáng)啟動子（PE/L）、增強(qiáng)型綠色熒光蛋白（EGFP）、終止信號（T5nT）的重組痘苗病毒穿梭質(zhì)粒pVTTΔE3L-EGFP,然后利用同源重組和Cre/Loxp系統(tǒng)構(gòu)建E3L基因缺失型痘苗病毒VTTΔE3L。檢測VTTΔE3L對BHK-21、HEK-293、OA3.TS、Marc-145和DF-1細(xì)胞存活率的影響并測定其在上述細(xì)胞中的一步生長曲線,初步明確VTTΔE3L的毒力和復(fù)制能力;連續(xù)傳代40代,檢測VTTΔE3L的遺傳穩(wěn)定性;滴鼻感染BALB/c小鼠,檢測其對小鼠體重變化的影響,初步明確VTTΔE3L的安全性。結(jié)果利用EGFP篩選標(biāo)記和Cre/Loxp特異性敲除系統(tǒng),通過多次挑斑篩選獲得了E3L基因缺失型痘苗病毒VTTΔE3L,且PCR鑒定VTT目的條帶大小為359bp,rVTTΔE3L-EGFP目的條帶大小為1 206bp。結(jié)晶紫染色圖表明VTTΔE3L對BHK-21細(xì)胞的抑制作用明顯弱于VTT,通過連續(xù)傳代40代,PCR沒有檢測到重... 

【文章來源】：中國病原生物學(xué)雜志. 2020,15(11)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

基因缺失型痘苗病毒VTTΔE3L的構(gòu)建、篩選及鑒定

VTTΔE3L感染HEK-293細(xì)胞、OA3.TS細(xì)胞、Marc-145細(xì)胞和DF-1細(xì)胞的存活率如圖3所示，其中隨著VTTΔE3L和VTT在不同細(xì)胞株中感染時間的延長，兩者對細(xì)胞的毒性均增強(qiáng)，但VTTΔE3L的毒性低于VTT。VTTΔE3L和VTT對Marc-145細(xì)胞毒性較強(qiáng)，細(xì)胞存活率較低。圖3 4種細(xì)胞感染基因缺失型痘苗病毒VTTΔE3L后的存活率變化

4種細(xì)胞感染基因缺失型痘苗病毒VTTΔE3L后的存活率變化

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]高效重組痘苗病毒天壇株載體系統(tǒng)的建立[J]. 張迪,許豐雯,熊梓辰,郭斐.  病毒學(xué)報(bào). 2019(02)
[2]甲3型流感病毒M2基因在痘苗病毒天壇株中的表達(dá)[J]. 王文玲,黃保英,鄧瑤,王秀平,譚文杰,阮力.  病毒學(xué)報(bào). 2007(05)

博士論文
[1]痘苗病毒天壇株生物學(xué)特性研究及其基因工程減毒載體的構(gòu)建[D]. 方清.武漢大學(xué) 2005

碩士論文
[1]基因缺失型天壇株痘苗病毒構(gòu)建及實(shí)驗(yàn)免疫研究[D]. 李一權(quán).吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[2]基因缺失天壇株痘苗病毒弱毒載體的構(gòu)建及鑒定[D]. 盛媛.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014



本文編號：3404533