發(fā)布時(shí)間：2021-09-17 03:04

　　谷子（Seteria italica）,是世界上最古老的的農(nóng)作物之一,擁有大量的有益性狀,如抗旱性、耐鹽性、耐貧瘠性等,去殼后的谷子俗稱小米,由于其含有豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),備受人們的青睞。隨著人們生活水平的提高,對(duì)谷子的品質(zhì)的要求也有所提高。然而,谷子遺傳轉(zhuǎn)化體系是一個(gè)世界性難題,到目前國(guó)內(nèi)外還沒(méi)有建立一個(gè)高效的遺傳轉(zhuǎn)化體系。本論文以谷子Ci846為研究材料,利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法,建立了一套高效的谷子轉(zhuǎn)化體系。率先在谷子中建立利用成熟的CRISPR/Cas9技術(shù)敲除的體系,以水稻香味基因OsBADH2的同源基因SiBADH2為例,成功地在谷子中實(shí)現(xiàn)了對(duì)SiBADH2基因的敲除。具體研究?jī)?nèi)容如下:1.針對(duì)谷子遺傳轉(zhuǎn)化效率低的問(wèn)題,本論文對(duì)谷子轉(zhuǎn)化體系進(jìn)行了優(yōu)化,經(jīng)多次平行對(duì)比試驗(yàn),篩選最佳的處理時(shí)間,采用70%的乙醇滅菌1 min,再用20%的次氯酸鈉溶液滅菌5 min,在此條件下的染菌率平均為0.52%,發(fā)芽率平均為99.83%;選擇MS培養(yǎng)基作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基;培養(yǎng)基中需要添加CuSO₄,ZnSO₄與2 mg/L 2,4-D,不需要添加KT、脯氨酸... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：80 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

第一代基因編輯工具的結(jié)構(gòu)（RAZZAQetal.,2019）

CRISPR/Cas9介導(dǎo)的GE（RAZZAQetal.,2019）

中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文第一章緒論11圖1-3基于CRISPR/Cas9的基因組編輯工作流程中的基本步驟（RAZZAQetal.,2019）Fig.1-3BasicstepsintheworkflowofCRISPR/Cas9-basedgenomeediting.到目前為止，利用CRISPR/Cas9，已經(jīng)成功地在模型中以及在主要作物中對(duì)目標(biāo)基因進(jìn)行了基因編輯。據(jù)報(bào)道，影響CRISPR/Cas9系統(tǒng)編輯能力的因素很多，包括靶DNA、GC含量、Cas9密碼子、sgRNA結(jié)構(gòu)以及Cas9和sgRNA的表達(dá)。以上因素都必須高度優(yōu)化，以實(shí)現(xiàn)CRISPR/Cas9系統(tǒng)編輯效率的提高（MAetal.,2015）。1.3.2.4CRISPR/Cas9介導(dǎo)的植物中的基因編輯在過(guò)去，在植物中進(jìn)行了許多基因編輯的嘗試，但CRIPSR/Cas9的編輯效率很低。隨著技術(shù)的進(jìn)步，CRISPR/Cas9的高效載體傳遞系統(tǒng)已被設(shè)計(jì)，并用于植物遺傳工程，如病毒感染的替代、順式元件的基因破壞、基因組缺失、基因敲除和多重基因組編輯等。這個(gè)編輯工具箱的不斷進(jìn)步


本文編號(hào)：3397835