發(fā)布時(shí)間：2021-09-11 21:38

　　在開(kāi)展花鱸（Lateolabrax maculatus）抗病毒飼料評(píng)價(jià)而采用qPCR進(jìn)行病毒增殖以及免疫基因表達(dá)分析中需要首先確定病毒感染后穩(wěn)定的內(nèi)參基因。本研究選取12個(gè)組織/細(xì)胞（中腸、肌肉、胃、腦、心、肝、鰓、頭腎、后腎、胸鰭、脾和花鱸腎細(xì)胞）,采用qPCR方法檢測(cè)花鱸虹彩病毒（Lateolabrax maculatus iridovirus,LMIV）感染前后RNAPoLⅡ、HPRT、TUBA、ACTB、18S rRNA、B2M、RPL7及EF1A8個(gè)基因的Ct值,采用GeNorm、NormFinder、BestKeeper軟件評(píng)估內(nèi)參基因表達(dá)的穩(wěn)定性。以篩選的內(nèi)參基因?yàn)榛A(chǔ)建立qPCR方法,在LMIV感染花鱸腎細(xì)胞系10、24、48、72、96、120 h后對(duì)病毒ORF92R、基因進(jìn)行表達(dá)分析。GeNorm軟件結(jié)果表明8個(gè)候選內(nèi)參基因在感染LMIV后的花鱸不同組織/細(xì)胞中的表達(dá)穩(wěn)定性為:RNAPoLⅡ=HPRT>RPL7>TUBA>ACTB>18SrRNA>B2M>EF1A。NormFinder軟件結(jié)果顯示18S rRNA在對(duì)照組花鱸不同組... 

【文章來(lái)源】：飼料工業(yè). 2020,41(24)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：9 頁(yè)

【部分圖文】：

攻毒組和對(duì)照組花鱸脾LMIV檢測(cè)電泳圖

Ge Norm分析顯示8個(gè)候選基因在正�；|不同組織/細(xì)胞中表達(dá)穩(wěn)定性為：RNAPo LⅡ=RPL7>18S r RNA>HPRT>ACTB>B2M>TUBA>EF1A，其中RNAPo LⅡ和RPL7是表達(dá)最穩(wěn)定的內(nèi)參基因；攻毒后8個(gè)內(nèi)參基因表達(dá)穩(wěn)定性為：RNAPo LⅡ=HPRT>RPL7>TUBA>ACTB>18S r RNA>B2M>EF1A，其中RNAPo LⅡ和HPRT的M值最小，是最穩(wěn)定的內(nèi)參基因，EF1A表達(dá)穩(wěn)定性最差(圖3A)；根據(jù)配對(duì)變異Vn/n+1值可以篩選多個(gè)內(nèi)參基因，最小配對(duì)變異值V2/3>0.15，且V3/4<0.15，因此選取3個(gè)內(nèi)參基因(圖4)；因此在LMIV感染后選取3個(gè)內(nèi)參基因(圖4A)，即RNAPo LⅡ、RPL7及HPRT。2.3.2 NormFinder軟件分析

Best Keeper軟件分析結(jié)果表明攻毒組中，TUBA、ACTB、18S r RNA、B2M、EF1A基因的SD>1，均不適合作為內(nèi)參基因使用，對(duì)照組中HPRT、TUBA、ACTB、B2M、EF1A基因的SD>1，也不適合作為內(nèi)參基因。8個(gè)內(nèi)參基因在攻毒后花鱸不同組織/細(xì)胞中RPL7的SD值最�。�0.68);18S r RNA在對(duì)照組中SD值最�。�0.66）（表4）。圖4 Vn/n+1比值分析

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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